2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:活化的HSC凋亡障礙是肝纖維化難以逆轉(zhuǎn)的主要原因。異喹啉生物堿具有明顯細胞毒作用,可顯著誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。為了保留異喹啉生物堿促凋亡活性并降低其細胞毒性,與復(fù)旦大學化學系合作,我們構(gòu)建了新型異喹啉類小分子化合物庫。本課題的目的是從新型異喹啉類小分子庫篩選出細胞毒性低促凋亡生物活性強的具有抗肝纖維化作用的新型異喹啉小分子化合物,由此希望研發(fā)出一類新型抗肝纖維化藥物先導(dǎo)化合物。
  方法:小分子化合物的篩查:(1)將復(fù)旦大

2、學化學系合成的小分子化合物分類整理。(2)MTT法檢測不同小分子化合物不同濃度(0μg/ml,2.5μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml)處理HSC-T6細胞24小時后,HSC增殖改變,并計算IC50值。(3)Hochest法檢測上述篩選出的陽性化合物(IC50<100μg/ml)對HSC-T6細胞凋亡能力的影響。
  12-4-Y促HSC凋亡機制的探索:(1)MTT法檢測不同濃

3、度12-4-Y處理HSC-T6不同時間(12h、24h、36h、48h)后HSC增殖變化,臺盼藍染色評估細胞活力;(2)Hoechst染色檢測凋亡小體;(3)流式細胞術(shù)對細胞凋亡進行定性檢測;(4)檢測凋亡關(guān)鍵蛋白Caspase3及其活化形式的表達變化;(5)Real time PCR檢測凋亡相關(guān)基因表達變化。
  結(jié)果:(1)MTT結(jié)果提示,所構(gòu)建的類天然小分子化合物庫中存在6種化合物(12-4-Y、12-1-Y、09-4-Y、

4、15-1-Y、11-2-Y、09-3-Y)對 HSC-T6細胞增殖有明顯的抑制作用,并且呈濃度依賴性,這6種陽性化合物的IC50值都在100μg/ml以內(nèi)。(2)Hochest染色結(jié)果顯示,上述陽性化合物中有1種化合物處理HSC-T6后可見明顯的凋亡小體。這種化合物的編號為12-4-Y(1-乙基-8-甲氧基-5苯基吡唑并[5,1-a]異喹啉)。(3)進一步以不同濃度的12-4-Y處理HSC-T6細胞株后,MTT顯示12-4-Y在12-4

5、8h及5-80μg/ml范圍內(nèi)可呈時間及濃度依賴性抑制HSC-T6增殖,臺盼藍染色顯示40μg/ml12-4-Y處理HSC-T6細胞系12h后細胞藍染(0.53±0.04)%,與對照組(0.98±0.02)%相比明顯增多(P<0.05);(4)20μg/ml12-4-Y處理HSC-T6細胞系24h后,Hoechst染色結(jié)果提示HSC-T6細胞系內(nèi)可見較多的凋亡小體,同時流式細胞儀凋亡定量檢測分析提示凋亡率為(29.23±1.20)%,顯

6、著高于對照組(5.47±1.39)%(P<0.001);(5)Western blot結(jié)果提示凋亡關(guān)鍵蛋白Caspase3的裂解產(chǎn)物表達較空白對照組顯著增加。(6)Real time PCR結(jié)果提示10μg/ml、20μg/ml12-4-Y與HSC-T6共孵育24h后,線粒體凋亡途徑相關(guān)的促凋亡基因 Bax、Caspase9的表達顯著上調(diào),抑制凋亡相關(guān)基因 Bc l2表達明顯下調(diào)(P<0.05)。
  結(jié)論:從異喹啉類小分子化合物

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