清心開竅方有效成分對(duì)AD大鼠腦內(nèi)凋亡相關(guān)基因的影響.pdf

1、目的：探討清心開竅方三種有效成分對(duì)AD大鼠大腦海馬及皮層區(qū)凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP表達(dá)的影響。
　　方法：選用成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠112只，隨機(jī)分為7組:正常組、假手術(shù)組、模型組、安理申組、皂苷組、揮發(fā)油組、多糖組，每組16只。采用海馬注射Aβ1-40誘導(dǎo)AD大鼠模型，造模后第2天開始灌胃，安理申組服用安理申溶液（鹽酸多奈哌齊片，1.67mg/kg/d）、皂苷組服用

2、皂苷提取物(9ml/kg/d)、揮發(fā)油組服用揮發(fā)油提取物(3.33ml/kg/d)、多糖組服用多糖提取物(8.33ml/kg/d)，正常組，假手術(shù)組，模型組給予等量雙蒸水灌胃，各組每天干預(yù)一次，連續(xù)2周(上午10:00)。灌胃結(jié)束后，對(duì)各組AD大鼠進(jìn)行心臟灌注生理鹽水及4％多聚甲醛固定后，采用TUNEL染色法檢測(cè)海馬CA1區(qū)及皮層區(qū)細(xì)胞凋亡;采用免疫組化法觀察Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP在大鼠海馬CA1區(qū)及皮層區(qū)組

3、織神經(jīng)元中的表達(dá);直接取雙側(cè)大腦海馬及皮層區(qū)凍存，采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)海馬、皮層區(qū)Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA及β-APP mRNA表達(dá)情況;采用Western Blot(WB)法檢測(cè)AD大鼠海馬、皮層區(qū)Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.TUNEL檢測(cè)結(jié)果:
　　正常組與假手術(shù)組之間海馬、皮層區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)/高倍鏡視野差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義(P＞0.05);與假手術(shù)組相比，模型組海馬及皮層區(qū)細(xì)胞凋亡數(shù)/高倍鏡視野顯著增多(P＜0.01);與模型組比較，各治療組海馬及皮層區(qū)細(xì)胞凋亡數(shù)均顯著減少(P＜0.01);與安理申組比較，揮發(fā)油組和多糖組海馬及皮層區(qū)細(xì)胞凋亡數(shù)均顯著增多(P＜0.05，P＜0.01);安理申組和皂苷組比較凋亡細(xì)胞數(shù)/高倍鏡視野差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。皂苷組較揮發(fā)油、多糖組減少顯著(P＜0.01)，
　　2.免疫組化檢測(cè)結(jié)果:
　

5、　與模型組比較，多糖組海馬區(qū)Bax、Bcl-2、β-APP及皮層區(qū)Bax、Bcl-2、Caspase-3和β-APP表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，揮發(fā)油組海馬及皮層區(qū)β-APP表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);其余治療組皮層及海馬區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯減少，Bcl-2表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);與安理申組比較，清心開竅方三種有效成分組，海馬及皮層區(qū)Bax、Caspa

6、se-3和β-APP表達(dá)明顯增加，Bcl-2表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。與皂苷組比較，揮發(fā)油組、多糖組Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯增多，Bcl-2表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　3.PCR檢測(cè)結(jié)果:
　　與模型組比較，多糖組海馬區(qū)Bax、Bcl-2和Caspase-3及皮層區(qū)Bax、Bcl-2和β-APP表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05

7、);多糖組皮層區(qū)Caspase-3和海馬區(qū)β-APP表達(dá)明顯減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);剩余治療組皮層及海馬區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯減少，Bcl-2表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);與安理申組比較，清心開竅方三種有效成分組，海馬及皮層區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯增加，Bcl-2表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。與皂苷組比較，揮

8、發(fā)油組、多糖組Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯增多，Bcl-2表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05， P＜0.01)。
　　4.WB檢測(cè)結(jié)果:
　　與模型組比較，多糖組海馬區(qū)Caspase-3和β-APP及皮層區(qū)Bax、Bcl-2、Caspase-3和β-APP表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);多糖組海馬區(qū)Bax表達(dá)明顯減少，海馬區(qū)Bcl-2表達(dá)明顯增多，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);剩余治療

9、組皮層及海馬區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯減少，Bcl-2表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);與安理申組比較，皂苷組海馬及皮層區(qū)Bcl-2、Caspase-3和β-APP表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);皂苷組海馬及皮層區(qū)Bax表達(dá)明顯增多，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);揮發(fā)油組和多糖組海馬及皮層區(qū)Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯增加，Bcl-2表達(dá)明顯減少，差

10、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。與皂苷組比較，揮發(fā)油組、多糖組Bax、Caspase-3和β-APP表達(dá)明顯增多，Bcl-2表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　5.各實(shí)驗(yàn)中Bcl-2/Bax表達(dá)比值結(jié)果:
　　與正常組比較，模型組Bcl-2/BAX比值下調(diào);與模型組比較，各治療組Bcl-2/BAX比值上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1.清心開竅方三種有效成分可以不同程度抑制A