Tbx3對Runx2活性與功能的影響的研究.pdf

1、骨骼是人體內(nèi)的重要組成成分，具有一定的形狀，結(jié)構(gòu)和硬度。骨骼由骨組成，在生物體的生命過程中不斷的進行著生長和改建的復(fù)雜演變。骨的發(fā)生方式有兩種，膜內(nèi)骨化成骨（間充質(zhì)細(xì)胞直接成骨）和軟骨內(nèi)骨化成骨（先形成軟骨后再成骨）。這兩個過程決定著生物體的存亡，并在轉(zhuǎn)錄水平上被嚴(yán)格的調(diào)控。在這個過程中有很多轉(zhuǎn)錄因子和蛋白質(zhì)起著重要作用。例如，Runx2是成骨細(xì)胞分化的重要的轉(zhuǎn)錄因子之一;最近Tbx3（Tbox包含因子）被報道，在生長激素的誘導(dǎo)下可以成

2、骨過程中，負(fù)調(diào)控Runx2和骨形成。本學(xué)位論文的研究工作主要集中在闡明Tbx3抑制Runx2和骨形成的分子機制。
　　成骨細(xì)胞中Runx2是主要的調(diào)控因子。在C3H10T1/2細(xì)胞中過表達(dá)Runx2來研究其功能以及影響Runx2功能的因子。很多報告顯示Runx2招募共激活因子（如HATs）或共抑制因子（如HDACs）來調(diào)控它的靶基因。選擇了HDAC1，5和P300(HAT)來分析存在或不存在Runx2的情況下乙?；负腿ヒ阴；傅?/p>

3、核定位。免疫熒光結(jié)果顯示，在存在和不存在Runx2的情況下這三個蛋白都在核內(nèi)定位，不發(fā)生核質(zhì)穿梭。
　　研究了Tbx3調(diào)控Runx2介導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化。在C3H10T1/2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染了Tbx3和Runx2。雙報告分析結(jié)果顯示，Tbx3干涉了Runx2介導(dǎo)的OPN啟動子的轉(zhuǎn)錄活性，從而消除了Runx2的活性。免疫熒光結(jié)果顯示，在過表達(dá)Tbx3細(xì)胞中Runx2在核質(zhì)中同時出現(xiàn)。這些結(jié)果證實，Tbx3消除了Runx2的活性，提高Tbx

4、3水平可以導(dǎo)致部分Runx2的細(xì)胞質(zhì)定位。
　　HDACs是一個大家族，它們被很多的細(xì)胞過程重要的轉(zhuǎn)錄因子所招募。研究了HDAC1是否參與Tbx3抑制Runx2的活性。用RT-PCR，免于印記和ALP染色等方法研究了HDAC1的表達(dá)和對Tbx3影響。在正常培養(yǎng)條件下，C3H10T1/2細(xì)胞同時過表達(dá)Tbx3和Runx2與C3H10T1/2細(xì)胞過表達(dá)Runx2相比，其HDAC1的mRNA水平增加兩倍;而在分化培養(yǎng)條件下其HDAC1的