B7-H3在骨肉瘤微環(huán)境中的表達及其作用機制.pdf

1、目的：骨肉瘤是高度惡性骨腫瘤，多見于兒童和青少年，臨床治療非常困難?；诠侨饬鎏厥獾陌l(fā)病位置和尚不清楚的發(fā)病機理，導(dǎo)致了骨肉瘤的生存率沒有得到進一步的提高。已經(jīng)有大量的學者對骨肉瘤生長的分子機制進行了深入研究，發(fā)現(xiàn)很多與其相關(guān)的基因，如SV40T抗原基因、p53基因、c-Fos基因、Rb基因、p62基因及其通路。B7-H3是由 Chapoval等人發(fā)現(xiàn)的 B7協(xié)同共刺激分子（costimulatory molecule）家族成員之一。大

2、量的研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3的表達與許多腫瘤有密切的關(guān)系，也有研究發(fā)現(xiàn) B7-H3可以介導(dǎo)細胞與細胞之間以及細胞與細胞外基質(zhì)蛋白之間的粘附，B7-H3的粘附功能的發(fā)現(xiàn)為解釋該分子在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用提供了新的線索。
　　方法：本實驗一共分三部分：
　?。?）利用 B7-H3過表達載體轉(zhuǎn)染小鼠的骨肉瘤細胞K7M2-WT，得到穩(wěn)定過表達 B7-H3的小鼠骨肉瘤細胞K7M2-WT(B7-H3)，并通過實時定量 PCR（real-t

3、ime PCR）、逆轉(zhuǎn)錄 PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）及流式細胞技術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）對該轉(zhuǎn)染細胞進行鑒定。
　?。?）對轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的小鼠骨肉瘤細胞依次進行了細胞粘附能力測試，細胞增殖能力測試，細胞水平遷移能力測試，細胞侵襲能力測試和細胞抗凋亡能力檢測。同時，通過檢測兩種細胞的ALP含量，研究是否存在B7-H3對其成骨分化能力造成影響的可能。
　?。?）建

4、立B7-H3過量表達的骨肉瘤動物模型，并通過這個模型對生長4周的骨肉瘤瘤體進行形態(tài)學、組織學及蛋白質(zhì)印跡（western blot）的研究。
　　結(jié)果：
　　（1）轉(zhuǎn)染后的小鼠骨肉瘤細胞通過實時定量 PCR、逆轉(zhuǎn)錄 PCR及流式細胞技術(shù)的鑒定，從 mRNA和蛋白質(zhì)水平上均發(fā)現(xiàn)B7-H3的表達量顯著高于未轉(zhuǎn)染組的小鼠骨肉瘤細胞K7M2-WT。
　?。?）通過比較K7M2-WT(B7-H3)和K7M2-WT的兩組細胞的相關(guān)

5、實驗結(jié)果，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定過表達 B7-H3的小鼠的骨肉瘤細胞K7M2-WT(B7-H3)在細胞粘附、細胞增殖、細胞水平遷移、細胞侵襲及細胞抗凋亡的能力都強于未轉(zhuǎn)染 B7-H3的小鼠骨肉瘤細胞K7M2-WT。同時，通過ALP檢測，發(fā)現(xiàn)B7-H3并沒有對其成骨分化能力造成影響。
　　（3）通過建立的動物模型，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染的 K7M2-WT(B7-H3)組的腫瘤明顯大于K7M2-WT組。同時還發(fā)現(xiàn) B7-H3在體內(nèi)微環(huán)境下持續(xù)高表達。