電刺激改善慢性低O2高CO2大鼠骨骼肌萎縮通過miR-486相關(guān)信號(hào)通路.pdf

1、目的:建立慢性大鼠低O2高CO2模型，大鼠予以電刺激，觀察慢性低O2高CO2及神經(jīng)肌肉電刺激對(duì)大鼠骨骼肌中與miR-486相關(guān)的PTEN/AKT/Fox01信號(hào)通路的影響，探討電刺激是否能通過miR-486調(diào)節(jié)PTEN/AKT/ Fox01信號(hào)通路而對(duì)慢性低O2高CO2誘導(dǎo)的大鼠骨骼肌萎縮產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　方法:隨機(jī)數(shù)字表法將32只SPF級(jí)雄性SD大鼠分為4組，正常對(duì)照組(NC)，低O2高CO2組(HH)，低O2高CO2+捆綁組

2、(HB)和低O2高CO2+捆綁電刺激組(HE)，每組8只。HH、HB、HE組置于常壓低O2高CO2養(yǎng)艙內(nèi)，維持艙內(nèi)O2濃度為9％～11％，CO2濃度為5.5％～6.5％， NC組置于對(duì)照艙內(nèi)吸入常壓空氣，其他條件相同，每天造模8h，每周7天，持續(xù)4周。其余時(shí)間四組大鼠置于正常環(huán)境中飼養(yǎng)（室溫20～23℃，相對(duì)濕度50％～70％）。第3、4周每日艙內(nèi)造模后，HE組雙下肢腓腸肌捆綁后予以30min、100Hz電刺激，HB組僅捆綁30min。

3、4周造模結(jié)束后全部大鼠麻醉狀態(tài)下取腓腸肌組織，后處死，石蠟包埋切片后蘇木精-伊紅(HE)染色觀測(cè)并計(jì)算各組肌纖維橫截面積，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組大鼠腓腸肌中miR-486表達(dá)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組大鼠腓腸肌中PTEN、p-Akt、Fox01蛋白的表達(dá)及分布，蛋白質(zhì)印跡法（Western blot法）檢測(cè)各組大鼠腓腸肌中PTEN、p-Akt、Akt、Fox01、atrogin-1和MuRF1蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　

4、(1) HE染色結(jié)果顯示，與NC組相比，HH組肌纖維橫截面積(CSA)明顯減小，差異顯著（P＜0.05);與HH組比，HE組CSA明顯增大，差異顯著（P＜0.05）; HH組與HB組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示與NC組相比，HH組骨骼肌miR-486表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);與HH組相比，HE組miR-486表達(dá)量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;HH組與HB組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

5、異。
　　(3)免疫組化顯示PTEN主要分布于胞漿，F(xiàn)ox01主要分布于胞核，p-Akt分布于胞核及胞漿，與NC組相比，HH組骨骼肌中PTEN和Fox01蛋白陽(yáng)性染色均明顯增多，而p-Akt陽(yáng)性染色明顯減少;與HH組比，HE組PTEN和Fox01蛋白陽(yáng)性染色均明顯減少，而p-Akt陽(yáng)性染色明顯增多;HH組與HB組比較三者均無明顯差異。
　　(4) Western blot顯示與NC組相比，HH組骨骼肌中PTEN、Fox01、

6、atrogin-1和MuRF1蛋白表達(dá)均增多，Akt和p-Akt蛋白表達(dá)均減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);與HH組比，HE組PTEN、Fox01、atrogin-1和MuRF1蛋白表達(dá)均減少，Akt和p-Akt蛋白表達(dá)均增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;HH組與HB組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　(1)慢性低O2高CO2可以引起實(shí)驗(yàn)大鼠骨骼肌的萎縮。
　　(2)電刺激可以改善慢性低O2高C