川芎、當歸超臨界CO2萃取物改善衰老小鼠肝腎損傷研究.pdf

1、目的:
　　人口老齡化已經(jīng)成為全球性公共衛(wèi)生問題。伴隨老年人口日益增多，老年肝腎病患者也隨之增多。肝臟和腎臟是人體中伴隨著衰老而出現(xiàn)明顯形態(tài)和功能改變的重要器官，研究衰老性肝腎損傷的發(fā)病機制，探討有效藥物對衰老性肝腎損傷的預(yù)防與治療，為臨床治療提供相關(guān)基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)，對于老齡化社會的醫(yī)療衛(wèi)生發(fā)展具有非常重要的意義。本課題旨在探討川芎、當歸超臨界CO2萃取物對D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠肝腎損傷的改善作用及其作用機制。
　　方法:

2、r>　　首先采用氣相色譜-質(zhì)譜連用(GC-MS)分析川芎、當歸超臨界CO2萃取物的化學(xué)成分，并對其體外抗氧化活性進行測定。選用SPF級八周齡雄性昆明小鼠，頸背部皮下注射D-半乳糖200 mg/(kg·d)誘導(dǎo)小鼠衰老性肝腎損傷模型，通過對比小鼠體重變化和臟器指數(shù)、測定肝腎功能性指標、觀察病理組織學(xué)變化，評價川芎、當歸超臨界CO2萃取物對小鼠衰老性肝腎損傷改善作用，并嘗試通過抗氧化和抗炎等路線初步探討川芎、當歸超臨界CO2萃取物改善小鼠衰

3、老性肝腎損傷的作用機制。
　　1.川芎、當歸超臨界CO2萃取物對小鼠衰老性肝腎損傷改善作用的評價
　　小鼠隨機分為八組，每組10只，即空白對照組(normal control)，D-半乳糖模型組(D-gal)，陽性對照組維生素E組(80 mg/kg)(VE)、川芎超臨界CO2萃取物兩個劑量組50、100 mg/kg(CX)，當歸超臨界CO2萃取物三個劑量組20、40、80 mg/kg(DG)。除正常對照組外，各組小鼠于頸背部

4、皮下注射D-半乳糖200mg/(kg·d)，給藥量為0.1ml/10g體重，正常對照組注射生理鹽水0.1ml/10g體重。造模時同時灌胃給藥，空白對照組和D-gal模型組給予等體積生理鹽水，均為每日1次，連續(xù)8周，小鼠固定每周記錄體重1次。末次造模給藥24小時后，將小鼠眼眶取血，處理后按照試劑盒方法測定肝功能指標(ALT、AST)和腎功能指標(BUN、CRE)，脫頸椎處死小鼠，解剖取出胸腺、脾臟、肝臟和腎臟，稱重后記錄并計算臟器指數(shù)，肝

5、腎臟進行石蠟包埋切片HE染色觀察病理組織學(xué)變化。
　　2.川芎、當歸超臨界CO2萃取物改善小鼠衰老性肝腎損傷的作用機制初步探討
　　課題采用生化定量法，測定肝腎臟中過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平，并采用實時熒光定量核酸擴增檢測這三種抗氧化酶的RNA表達。課題還通過體外抗氧化試驗輔助驗證CX、DG的抗氧化能力。課題還采用免疫印跡法分析

6、iNOS、COX2、NF-κB的蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.川芎、當歸超臨界CO2萃取物GC-MS分析及體外抗氧化作用
　　經(jīng)檢測，川芎超臨界CO2萃取物和當歸超臨界CO2萃取物主要化學(xué)成分為苯酞類，藁本內(nèi)酯為主要成分。其中DG含量比CX高，分別為84.18％、59.221％。藁本內(nèi)酯作為二者主要藥理活性成分，其含量可能影響其藥理作用強弱。
　　2.川芎、當歸超臨界CO2萃取物體外抗氧化作用分析
　　從

7、自由基清除實驗和還原力測定實驗結(jié)果看，川芎、當歸超臨界CO2萃取物均具有一定程度的體外抗氧化能力，其中當歸超臨界CO2萃取物體外抗氧化能力比川芎超臨界CO2萃取物略高。
　　3.川芎、當歸超臨界CO2萃取物對小鼠衰老性肝腎損傷改善作用的評價
　　實驗數(shù)據(jù)表明，D-半乳糖的作用下模型組小鼠體重和臟器指數(shù)低于正常組，CX、DG用藥組可升高體重以及臟器指數(shù)，使其接近正常水平，但并沒有體現(xiàn)劑量梯度。CX、DG可降低由半乳糖導(dǎo)致的肝腎

8、功能指標異常，且效果體現(xiàn)劑量梯度。病理組織切片觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠肝腎臟都有損傷，CX、DG對肝腎組織損傷有明顯改善作用。
　　4.川芎、當歸超臨界CO2萃取物改善小鼠衰老性肝腎損傷的作用機制初步探討
　　體外抗氧化實驗結(jié)果指示CX、DG具有一定抗氧化能力;CX、DG明顯降低小鼠肝腎臟中MDA水平，明顯升高SOD、CAT和GSH-Px的活性，并體現(xiàn)劑量梯度;實時熒光定量核酸擴增檢測結(jié)果表明CX、DG均可增加SOD、CAT