甲基化抑制劑5-Aza-CdR對肺癌A549細(xì)胞株DNMT1及c-myc,MKi-67,P53基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討甲基化抑制劑5-氮雜-2’脫氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine，5-Aza-CdR）對肺癌A549細(xì)胞株中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-1（DNMT1）、c-myc、MKi-67和P53基因表達(dá)的影響。從而為揭示基因低甲基化或去甲基化與肺癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)組為甲基化抑制劑5-Aza-CdR處理的肺癌A549細(xì)胞株細(xì)胞，對照組為不加藥的肺癌A549細(xì)胞株細(xì)胞；藥物處理72小時(shí)后，采用熒

2、光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(FQ-PCR)技術(shù)檢測A549細(xì)胞株細(xì)胞中DNMT1，c-myc，MKi-67及P53基因mRNA的表達(dá)，蛋白質(zhì)印跡方法（Western blot）檢測DNMT1，c-myc，MKi-67及P53蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴甲基化抑制劑5-Aza-CdR處理肺癌A549細(xì)胞株細(xì)胞后，與對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組肺癌A549細(xì)胞生長明顯受到抑制；⑵FQ-PCR結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組DNMT1、c-myc和MKi-67mRNA

3、的表達(dá)量（0.35±0.02、0.33±0.03、0.29±0.01）明顯低于對照組（1.04±0.06、1.02±0.03、0.98±0.03），而實(shí)驗(yàn)組中P53mRNA表達(dá)量明顯高于對照組（1.59±0.04比0.89±0.09），兩組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；⑶Western blot結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組DNMT1、c-myc和MKi-67蛋白的表達(dá)量（0.43±0.03、0.45±0.05、0.33±0.03）明顯低于對照

4、組（1.21±0.06、1.31±0.12、0.51±0.09），而實(shí)驗(yàn)組中P53蛋白表達(dá)量明顯高于對照組（1.92±0.05比0.70±0.02），兩組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：①甲基化抑制劑5-Aza-CdR可使體外培養(yǎng)的肺癌A549細(xì)胞生長受到抑制；②甲基化抑制劑5-Aza-CdR可使肺癌A549細(xì)胞中DNMT1、c-myc、MKi-67基因表達(dá)降低，P53基因表達(dá)增高，這可能與基因啟動(dòng)子區(qū)域出現(xiàn)的去甲基化有關(guān)，可為去