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文檔簡介
1、近年來,金屬氧釩配合物因其具有多樣的生物活性受到廣泛的關(guān)注和研究,其中氧釩配合物具有較好的抗腫瘤活性已被報道,但其具體的抗腫瘤機制尚不明確。為進一步了解氧釩配合物的抗腫瘤機制,本文合成了系列新型氧釩配合物,通過細胞生物活性的測試探討了其抗腫瘤活性及機制。主要工作如下:
1、設(shè)計合成以氨基酸類schiff base及5-氨基乳清酸schiff base為主配體,1,10-林菲啰啉為輔助配體的不對稱系列新型氧釩配合物。采用元素分析
2、、紅外(FT-IR)、ESI-MS、核磁共振技術(shù)和電導率等對其結(jié)構(gòu)進行表征。
2、通過UV-Vis光譜滴定、熒光光譜滴定,粘度法及瓊脂糖電泳研究新型化合物與DNA的相互作用。結(jié)果顯示,這些化合物與DNA都具有較好的結(jié)合能力,并且在H2O2存在的條件下,對質(zhì)粒DNA具有良好的斷裂作用。此類化合物的這種化學核酸酶的作用,可能是因為這些氧釩配合物與H2O2相互作用產(chǎn)生了羥基自由基,自由基強烈作用于DNA從而導致斷裂的發(fā)生。此外,本文
3、還對相關(guān)化合物的抗氧化能力進行檢測,其變化趨勢與斷裂DNA類似。實驗顯示,在低濃度條件下,化合物對羥基自由基(·OH)具有良好的抑制作用。但值得注意的是,隨著濃度的升高并達到一定濃度后,它們對自由基的清除率反而下降。
本文還研究了新型氧釩配合物與BSA的相互作用。結(jié)果顯示,氧釩配合物能與BSA(牛血清白蛋白)很好地結(jié)合,這提示此類化合物在活體內(nèi)能夠很好地存在蛋白當中。
3、采用MTT法對不同腫瘤細胞系的抗腫瘤活性進行
4、篩選,以順鉑作為陽性對照。實驗結(jié)果表明,該類化合物都具有較好的抗腫瘤活性,部分化合物對某些腫瘤細胞的抑制作用比順鉑好。
為了解該類化合物的抗腫瘤作用的機制,運用流式細胞術(shù),對細胞的凋亡率及凋亡周期進行了檢測。實驗證實,新型氧釩配合物能誘導腫瘤細胞凋亡,且這種凋亡具有濃度依賴性;對細胞周期的檢測表明,腫瘤細胞的周期主要是被阻滯在G2/M期,以及少量的S期。其次,采用western blot方法初步研究了這類化合物對蛋白p53、b
5、ax及bcl-2的表達的影響。結(jié)果表明,它們可引起p53表達增加。這在一定程度上說明,此類化合物可進入細胞內(nèi)并打破p53與DNA的平衡,使得p53表達產(chǎn)生異常,從而引起下游的相關(guān)位點蛋白表達的激活,進而導致細胞的凋亡。另外,本文還進行了細胞的線粒體膜電位的檢測。實驗表明,新型化合物可使細胞的線粒體膜電位產(chǎn)生較大的下降。
基于上述實驗結(jié)果,初步推斷這類化合物誘導細胞凋亡的途徑可能如下:化合物首先與細胞內(nèi)的DNA相互作用,影響DN
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