2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:前期通過(guò)基因芯片技術(shù)和生物信息學(xué)相結(jié)合的方法研究發(fā)現(xiàn)miR-181a在慢性粒細(xì)胞白血?。–ML)中有多個(gè)靶基因,經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PPFIA1受 miR-181a的直接調(diào)控,初步鑒定PPFIA1具有癌基因功能,但PPFIA1在CML中確切的分子作用機(jī)制尚不清楚。
  研究目的:本課題致力于探索PPFIA1對(duì)CML惡性進(jìn)展的影響及其下游磷酸化信號(hào)分子和相互作用的蛋白鑒定,為白血病分子靶向治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
  研究方法:

2、
  1.利用PPFIA1慢病毒顆粒構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)PPFIA1蛋白的K562細(xì)胞;Western Blot驗(yàn)證K562細(xì)胞內(nèi)PPFIA1表達(dá)水平;
  2.脂質(zhì)體LipofectamineTM3000轉(zhuǎn)染PPFIA-siRNA到 K562細(xì)胞;
  3.Biotool Vita-Blue試劑檢測(cè)PPFIA1對(duì)K562細(xì)胞藥物敏感性的影響;
  4.甲基纖維素集落形成法檢測(cè)PPFIA1對(duì)K562細(xì)胞增殖能力的影響;

3、
  5.Transwell小室法檢測(cè)PPFIA1對(duì)K562細(xì)胞侵襲能力的影響;
  6.磷酸化抗體芯片檢測(cè)靶向抑制PPFIA1后K562細(xì)胞相應(yīng)磷酸化蛋白表達(dá)水平的改變,并在K562和KCL-22細(xì)胞中使用Western Blot驗(yàn)證相關(guān)信號(hào)分子的改變;
  7.利用flag-PPFIA1慢病毒顆粒構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)flag-PPFIA1融合蛋白的K562細(xì)胞株,flag-BCR/ABL和myc-PARP1質(zhì)粒構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)

4、flag-BCR/ABL的293T細(xì)胞株;
  8.免疫沉淀(IP)flag-PPFIA1和flag-BCR/ABL融合蛋白,利用蛋白質(zhì)質(zhì)譜技術(shù)鑒定兩組IP產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)組成。
  9.Discovery Studio4.5 Client軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的空間模擬對(duì)接,分別預(yù)測(cè)與PPFIA1及BCR/ABL蛋白直接作用的特異性蛋白,對(duì)免疫沉淀產(chǎn)物中的特異性蛋白質(zhì)分子進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
  10.P

5、ARP1抑制劑Olaparib處理K562-LentiV PPFIA1后CCK8檢測(cè)藥物敏感性及細(xì)胞克隆形成能力的變化。
  研究結(jié)果:
  1.Western Blot檢測(cè)病毒感染后K562-PPFIA1 LentiV比K562-empty LentiV細(xì)胞內(nèi)的PPFIA1蛋白表達(dá)水平明顯升高;
  2.過(guò)表達(dá)PPFIA1基因后降低了K562細(xì)胞對(duì)Imatinib和Dasatinib的藥物敏感性,增強(qiáng)了K562細(xì)胞的

6、colony形成和侵襲能力;
  3.靶向抑制PPFIA1增強(qiáng)了K562細(xì)胞對(duì)Imatinib的藥物敏感性,減弱了K562細(xì)胞的colony形成和侵襲能力;
  4.磷酸化芯片顯示,靶向抑制PPFIA1蛋白磷酸化水平下降率高于20%的蛋白有28種。其中C-KIT(Tyr721)磷酸化水平下降最明顯,達(dá)76%,Western Blot結(jié)果顯示PPFIA1能激活C-KIT、Akt、ERK1/2磷酸化信號(hào)通路,靶向抑制PPFIA1

7、可以降低其磷酸化信號(hào)水平。
  5.質(zhì)譜鑒定flag-BCR/ABL免疫沉淀產(chǎn)物有132種特異性蛋白,而flag-PPFIA1免疫沉淀產(chǎn)物有42種,其中PARP1和NCOA5是flag-PPFIA1和flag-BCR/ABL兩個(gè)免疫沉淀產(chǎn)物中共同存在的蛋白質(zhì)分子。
  6.空間模擬對(duì)接和免疫共沉淀(Co-IP)結(jié)果顯示PPFIA1能和PARP1相互直接結(jié)合。
  7.PARP1抑制劑Olaparib能顯著減弱K562-

8、LentiV PPFIA1細(xì)胞的活力和colony形成能力。
  8.過(guò)表達(dá)PPFIA1可以激活PARP1/P65/C-KIT的磷酸化表達(dá)水平,靶向抑制PPFIA1和PARP1均可抑制P65和C-kit的磷酸化表達(dá)水平。
  研究結(jié)論:
  1.PPFIA1在CML中具有癌基因功能,靶向抑制PPFIA1基因的表達(dá)可以抑制CML惡性進(jìn)展。.
  2.PPFIA1下游涉及C-KIT等28個(gè)磷酸化信號(hào)分子。
  

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