神經(jīng)膠質(zhì)瘤納米級染色劑的制備與檢測研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見的惡性腫瘤之一。手術(shù)聯(lián)合放療同步替莫唑胺化療是目前治療新診斷膠質(zhì)瘤的標(biāo)準(zhǔn)方案。手術(shù)是否完全徹底切除腫瘤是影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的最主要因素之一。由于膠質(zhì)瘤呈浸潤性生長，術(shù)前檢查和術(shù)中顯微鏡下無法準(zhǔn)確定位和判斷腫瘤與正常腦組織邊界，手術(shù)難以完全切除，手術(shù)后極易復(fù)發(fā)，預(yù)后極差。然而，國外相關(guān)研究表明，該標(biāo)準(zhǔn)治療方案使新診斷膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者生存獲益，但其中位生存期僅為14.6個月，5年的生存率僅為9.

2、8％，生存時間非常有限，療效仍難以令人滿意。膠質(zhì)瘤是嚴(yán)重影響人類身體健康的重大疾病。隨著手術(shù)顯微鏡、神經(jīng)外科導(dǎo)航技術(shù)的廣泛應(yīng)用，以及B超、CT和MRI術(shù)中定位技術(shù)不斷發(fā)展和應(yīng)用，膠質(zhì)瘤手術(shù)全切率有所提高。由于設(shè)備成本高，目前仍難以臨床廣泛推廣。光動能與光敏劑的術(shù)中定位技術(shù)近年開始應(yīng)用于臨床，但存在腫瘤組織周圍手術(shù)滲血區(qū)也顯影淡綠色熒光的不足。目前，普遍采用5-氨基酮戊酸(5-ALA)介導(dǎo)的第二代光敏劑術(shù)中需要藍光激發(fā)，使膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)出紅

3、色熒光，應(yīng)用非常有限。隨著新型分子轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，分子生物熒光劑或納米染色劑可能成為新的熒光劑，有望作為膠質(zhì)瘤術(shù)中定位全新的發(fā)展方向。如何確定神經(jīng)膠質(zhì)瘤的邊界，在盡可能的少切除正常腦組織的情況下完全切除神經(jīng)膠質(zhì)瘤，提高腫瘤切除率的同時減少損傷是神經(jīng)外科醫(yī)生面臨的一大難題，納米染色劑的理念提出為此提供了可能。
　　材料與方法：
　　精密稱取處方量的大豆卵磷脂、替莫唑胺、胎牛血清離心液的上清液、雙氨基PEG溶液加入3ml環(huán)己烷

4、溶液，進行超聲振蕩，使各種原料溶解在環(huán)己烷中。向溶液中加入處方量京尼平，進行振蕩超聲后將溶液放入40℃水浴鍋，進行磁力攪拌，進行一定時間的交聯(lián)。將上述交聯(lián)完畢的溶液接入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，去除環(huán)己烷，然后加入3ml純化水，并進行振蕩超聲，即制成藍色納米染色劑溶液。將上述制成的藍色納米級染色劑溶液放入-40℃環(huán)境中2h，取出后接入凍干機48h，制成神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑凍干粉。根據(jù)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑凍干粉的制作方法，利用正交實驗方

5、法進行實驗處方的篩選，篩選出最佳的制備處方。選出對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑凍干粉制備過程中影響較大的磁力攪拌速度、水浴溫度、交聯(lián)時間，分別進行優(yōu)化選擇。對利用最優(yōu)方案制備出的經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑的凍干粉分別進行平均納米粒度、平均電荷檢測，并對電鏡下形態(tài)學(xué)、凍干粉形態(tài)學(xué)、水溶液中形態(tài)學(xué)、PH值、以及穩(wěn)定性進行考察。建立SD大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型，對膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑的染色效果進行檢驗。
　　結(jié)果：
　　1.制備神經(jīng)

6、膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑的最佳工藝處方為大豆卵磷脂60mg，胎牛血清900μL，雙氨基PEG10mg·ml－1，替莫唑胺2mg·ml－1，京尼平1.5mg·ml－1。
　　2.在制備神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑的過程中，工藝優(yōu)化分別為：磁力攪拌速度為400rpm，水浴溫度為40℃，交聯(lián)時間為48h。
　　3.神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑水溶液電鏡下形態(tài)基本呈圓形且分散均勻，在肉眼直觀下分散均勻且無顆粒及漂浮物存在；神經(jīng)膠質(zhì)瘤

7、的藍色納米級染色劑凍干粉肉眼觀呈粉末狀或顆粒狀存在。
　　4.神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑水溶液的PH值為5.72，稀釋10倍后PH值為5.85，稀釋100倍后PH值為6.026，稀釋1000倍后PH值為6.163。
　　5.神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑穩(wěn)定性好，放置半年后，粒徑基本不變。
　　6.在動物實驗中腫瘤有明顯染色效果，滿足神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑的制作效果與制作目的。
　　7.神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米

8、級染色劑在24h內(nèi)在水溶液中可保持穩(wěn)定，神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑凍干粉的藥物包封率為25.97%，神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑凍干粉載藥量為：0.575%。
　　結(jié)論：
　　1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤藍色納米級染色劑的粒徑≤100 nm，具有容易穿透生物膜等生理組織屏障的能力。
　　2、神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藍色納米級染色劑可染藍腫瘤組織，不需要特殊的手術(shù)室和借助額外的儀器，在正常光線和普通手術(shù)室中，醫(yī)護人員就能肉眼區(qū)分腫瘤組織與正常組