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文檔簡介
1、人類膠質瘤細胞膜高豐度表達鈣激活鉀通道,即gBK通道,與人類BK通道(hbr5)同源性最高,對鈣離子高度敏感性,對膠質瘤細胞的增殖與遷移影響巨大。發(fā)掘和鑒定gBK通道的高特異性配體和調制劑,有益于神經膠質瘤型gBK通道參與細胞增殖與遷移的病理功能與信號通道機制的研究,并對此相關疾病藥物的研發(fā)具有重要的理論參考價值和實際運用意義。Martentoxin是自東亞鉗蝎(Buthus martensi Karsch,BmK)蝎毒中純化的一個37
2、肽短鏈毒素,積累的研究資料表明,該毒素可以鈣依賴方式調控神經型BK通道(α+β4)的活性。 本論文利用細胞培養(yǎng)、細胞活力檢測、膜片鉗和熒光成像等方法,研究了martentoxin對神經膠質瘤型BK通道(gBK)的藥理調制效應及其機制。研究發(fā)現(xiàn),當胞內液自由鈣濃度分別被控制在150nM、28μM和5mM時,martentoxin可劑量依賴地增強gBK通道活性。當胞內液中缺失鈣離子時,martentoxin可以顯著地抑制gBK通道活
3、性。分別在上述三種鈣濃度存在下,martentoxin對gBK通道電流的增強比率無顯著性差異,提示了martentoxin對gBK通道的藥理學效應僅取決于內鈣的有無,不受內鈣濃度高低的影響。保持細胞內鈣濃度恒定,給予不同電壓刺激時,martentoxin對gBK通道的增強性藥理調制效應無顯著不同,排除了martentoxin影響到電壓感受器的可能。此外,iberiotoxin與martentoxin的混合藥物施加與iberiotoxin
4、單獨施加對gBK通道活性的調制效應無顯著性差異,表明martentoxin增強gBK通道的作用位點有別于iberiotoxin抑制gBK通道活性的孔區(qū)域,提示了manentoxin可能通過增強人類腦膠質瘤U251-MG細胞中gBK通道的β亞基與α亞基的相互作用提高gBK通道活性。另一方面,經MTT實驗表明,與iberiotoxin不同,martentoxin可以劑量依賴性地促進U251-MG細胞的增殖,由此證實gBK通道是martent
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