丙烯腈誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對雄性大鼠睪丸細(xì)胞NF-κB信號通路影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探索丙烯腈(Acrylonitrile,ACN)引起雄性大鼠睪丸氧化應(yīng)激對NF-κB信號通路的影響,以及NF-κB激活后對凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用,為進(jìn)一步研究ACN的睪丸生殖毒性機(jī)制提供依據(jù)。
  方法:將50只SPF級健康成年SD雄性大鼠,按體重隨機(jī)分為5組,每組10只,飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級實(shí)驗(yàn)動物中心,自由進(jìn)食及飲水,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,以12.5、25、50 mg/kg ACN、50 mg/kg ACN+300

2、mg/kg N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)灌胃,聯(lián)合組NAC灌胃30分鐘后再灌ACN,對照組大鼠給予等體積玉米油,1次/天,6天/周,共13周。每隔3天監(jiān)測一次體重,末次采血后處死動物。(1)分離大鼠睪丸、附睪等臟器并稱重,計算臟器系數(shù)。(2)制備睪丸HE染色病理切片,光鏡下觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)改變。(3)可見光分光光度法檢測睪丸組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、還原型谷胱甘肽

3、/氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)、丙二醛(MDA)。(4)免疫熒光染色法檢測睪丸核因子-κB(NF-κB)激活及核轉(zhuǎn)移。(5)Real-Time PCR檢測睪丸Bax、Bcl-2基因表達(dá)情況。(6)Western Blot檢測睪丸p65、IKK、IκB、p-IκB、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)情況。
  結(jié)果:(1)實(shí)驗(yàn)開始前及染毒過程中各劑量組大鼠體重之間比較均無顯著性差異(P>0.05)。中、高劑量染毒組大鼠睪丸臟器系數(shù)

4、與對照組比較顯著降低(P<0.05)。各劑量組間大鼠附睪臟器系數(shù)比較無顯著性差異(P>0.05)。(2)光鏡下可見,中劑量染毒組大鼠睪丸曲細(xì)精管密集程度較低,初級精母細(xì)胞染色程度豐富、數(shù)量較多,睪丸間質(zhì)細(xì)胞較少,輪廓較清晰。高劑量染毒組大鼠睪丸曲細(xì)精管排列稀疏,密集程度低,管徑變小,各級生精細(xì)胞排列不規(guī)則,數(shù)量少,睪丸間質(zhì)稀疏、間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量少、輪廓不清晰。(3)低、高劑量染毒組大鼠睪丸GSH/GSSG比值、GSH-Px酶活性與對照組比較

5、顯著降低(P<0.05)。中、高劑量染毒組大鼠睪丸 MDA含量與對照組比較顯著升高(P<0.05)。NAC預(yù)處理后,高ACN+NAC組大鼠睪丸MDA含量與高ACN組比較顯著降低(P<0.05);高ACN+NAC組大鼠睪丸GSH/GSSG比值與高ACN組比較顯著升高(P<0.05);(4)免疫熒光結(jié)果顯示,高ACN組大鼠睪丸p65蛋白表達(dá)升高,轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核p65升高,表明高ACN組大鼠睪丸NF-κB被激活。用NAC提前處理后p65蛋白表達(dá)

6、及核轉(zhuǎn)移顯著減少。Western Blot結(jié)果示,高劑量染毒組大鼠睪丸IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達(dá)與對照組比較顯著升高(P<0.05),IκB蛋白表達(dá)與對照組比較顯著降低(P<0.05)。高 ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸 IKK-α/β蛋白、p65蛋白、p-IκB蛋白表達(dá)與高ACN組比較顯著降低(P<0.05),IκB蛋白表達(dá)與高ACN組比較顯著升高(P<0.05)。(5)RT-PCR和Western Blot

7、結(jié)果示,高劑量染毒組大鼠睪丸 Bax mRNA及蛋白表達(dá)水平與對照組比較顯著升高(P<0.05)。高劑量染毒組大鼠睪丸 Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。高ACN+NAC聯(lián)合染毒組大鼠睪丸Bax mRNA及蛋白表達(dá)水平與高ACN組比較顯著降低(P<0.05)。
  結(jié)論:(1)ACN亞慢性染毒可引起大鼠睪丸發(fā)生病理性損傷。(2)ACN引起的睪丸損傷可能與氧化應(yīng)激有關(guān)。(3)ACN誘導(dǎo)睪

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