肺腺癌中miR-145低表達(dá)的分子機(jī)制及與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、本文通過以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 肺腺癌中miR-145低表達(dá)的分子機(jī)制研究
　　目的:肺癌是發(fā)病率與病死率最高的惡性腫瘤。本課題組前期研究表明，microRNA-145(miR-145)可以靶向OCT4基因抑制肺腺癌細(xì)胞株中干細(xì)胞的增殖，miR-145還能對(duì)肺腺癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)進(jìn)行調(diào)控。針對(duì)miR-145下游靶基因及其生物學(xué)功能的

2、研究已廣泛報(bào)道，但miR-145作為一種腫瘤抑制性miRNA，其在包括肺腺癌組織內(nèi)廣泛低表達(dá)的分子機(jī)制則研究甚少。我們通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miR-145編碼基因上游啟動(dòng)子區(qū)域有較多CpG位點(diǎn)。為進(jìn)一步肺腺癌中miR-145低表達(dá)的分子機(jī)制，我們采用Sequenom MassARRAY甲基化DNA定量分析技術(shù)，對(duì)肺腺癌組織中miR-145上游啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化情況進(jìn)行定量分析。
　　方法:用來自Cancer Browser(htt

3、ps://genome-cancer.ucsc.edu/)的甲基化芯片數(shù)據(jù)。該芯片包含miR-145上游的三個(gè)甲基化位點(diǎn)(cg11671363，cg22941668，cg08537847)。我們比較了這3個(gè)CpG位點(diǎn)在肺腺癌和癌旁組織的甲基化比例，另外，我們用專業(yè)的甲基化數(shù)據(jù)分析網(wǎng)站MethHC(http://MethHC.m bc.nctu.ed u.tw)對(duì)miR-145上游CpG位點(diǎn)的甲基化程度和相應(yīng)的miR-145表達(dá)進(jìn)行了相關(guān)

4、性分析。用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜胞苷（5-azacytidine，5-aza-C）對(duì)肺腺癌細(xì)胞株A549、H1975及SPC-A-1進(jìn)行處理，比較miR-145的表達(dá)變化。收集手術(shù)切除的肺腺癌及癌旁組織標(biāo)本共20對(duì)，用磁珠法基因組DNA提取試劑盒protocol提取組織DNA。經(jīng)DNA定量和純度測(cè)定予以質(zhì)檢后，應(yīng)用甲基化DNA定量分析平臺(tái)和半定量RT-PCR技術(shù)，對(duì)癌和癌旁組織miR-145啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平進(jìn)行定量分析。

5、
　　結(jié)果:根據(jù)來自TCGA的芯片數(shù)據(jù)，在肺腺癌組織中，miR-145上游CpG位點(diǎn)甲基化率顯著高于癌旁組織，且其甲基化率和miR-145表達(dá)顯著相關(guān)。經(jīng)5-aza-C處理后，A549、H1975及SPC-A-1細(xì)胞系中的miR-145表達(dá)均明顯上調(diào)。甲基化定量數(shù)據(jù)顯示在肺腺癌組織miR-145基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化率均值明顯高于癌旁組織(0.59比0.32，P＜0.01)。并且在肺腺癌組織中，miR-145基因啟動(dòng)子區(qū)域的所有1

6、3個(gè)CpG位點(diǎn)均呈顯著高甲基化。
　　結(jié)論:miR-145表達(dá)與其編碼基因上游CpG位點(diǎn)甲基化率相關(guān)。肺腺癌組織內(nèi)miR-145基因啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)高甲基化與該基因表達(dá)水平變化密切相關(guān)。
　　第二部分 miR-145低表達(dá)與肺腺癌預(yù)后的關(guān)系研究
　　目的:MicroRNA(miRNA)可以通過細(xì)胞增殖、分化、凋亡、免疫反應(yīng)及血管生成等一系列過程在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。已有越來越多的miRNA被證實(shí)可作為腫瘤的預(yù)

7、后指標(biāo)。鑒于miR-145在肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展中所發(fā)揮的至關(guān)重要的作用，我們猜想它可能是肺腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　方法:我們聯(lián)合應(yīng)用原位雜交和組織芯片技術(shù)檢測(cè)92例肺腺癌和癌旁組織中miR-145的表達(dá)情況。根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)分，將miR-145在肺腺癌中的表達(dá)和患者其他臨床病例特征進(jìn)行相關(guān)性分析，并結(jié)合預(yù)后資料進(jìn)行生存分析。
　　結(jié)果:miR-145的表達(dá)和肺癌組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯以及TNM分期直接相關(guān)

8、，并且可以作為肺腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。生存分析顯示，miR-145低表達(dá)組的患者其總生存期(HR=2.128，P=0.004)和無進(jìn)展生存期(HR=2.182，P=0.003)均較短。單因素和多因素分析隨后進(jìn)一步證實(shí)miR-145低表達(dá)是肺腺癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OS: HR=1.787，95％ CI=1.021-3.128，p=0.042; DFS:HR=1.833,95％CI=1.048-3.206，p=0.034)。
　　結(jié)論