降脂通絡(luò)軟膠囊對膜性腎病大鼠的腎保護(hù)作用及對腎組織α-actinin-4、ZO-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：運(yùn)用陽離子化牛血清白蛋白（ cationic bovine serum albumin， C-BSA）尾靜脈注射的方法成功復(fù)制膜性腎?。?membranous nephropathy，MN）大鼠模型，并給予降脂通絡(luò)軟膠囊、鹽酸貝那普利進(jìn)行干預(yù)，通過測定大鼠24小時(shí)尿蛋白定量、血生化指標(biāo)，光鏡、免疫熒光、電鏡觀測大鼠腎臟病理變化，免疫組化檢測α-actinin-4、ZO-1蛋白及real-time PCR法檢測α-actinin-4

2、、ZO-1 mRNA在腎臟中的表達(dá)，來探討降脂通絡(luò)軟膠囊對膜性腎病大鼠的腎保護(hù)作用及對腎組織α-actinin-4、ZO-1表達(dá)的影響，從而為臨床治療膜性腎病提供理論依據(jù)。
　　方法：選取健康SD大鼠60只，普通飼料喂養(yǎng)一周后，測定24小時(shí)尿蛋白定量均在正常范圍內(nèi)，隨機(jī)分為正常組（ZG）10只，造模組50只。造模組預(yù)免疫1周后，尾靜脈注射陽離子化牛血清白蛋白，每周三次，共四周。測定24小時(shí)尿蛋白定量，確定模型復(fù)制成功后，隨機(jī)分為模

3、型組（MG）、西藥組（BG）、降脂通絡(luò)低劑量組（JLG）、降脂通絡(luò)中劑量組（JMG）、降脂通絡(luò)高劑量組（JHG），每組各10只。西藥組給予鹽酸貝那普利（10mg/kg/d）研磨溶于3ml生理鹽水灌胃，降脂通絡(luò)低、中、高劑量組分別給予降脂通絡(luò)軟膠囊（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）溶于3ml生理鹽水灌胃，模型組和正常組給予同等劑量的生理鹽水灌胃。灌胃4周后，測定各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量（24-hour ur

4、inary total protein，UTP），腹主動(dòng)脈取血，測定血總蛋白（serum total protein，TP）、血白蛋白（albumin，ALB）、血總膽固醇（total cholesterol，TC）、血甘油三酯（triglyceride，TG）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（serum creatinine，Scr）等生化指標(biāo)，留取新鮮腎臟組織，通過光鏡、免疫熒光、電鏡觀測大鼠腎臟

5、病理變化，免疫組化檢測α-actinin-4、ZO-1蛋白及real-time PCR法檢測α-actinin-4、ZO-1 mRNA在腎臟中的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴正常組大鼠毛發(fā)光澤、精神良好、反應(yīng)靈敏。模型復(fù)制成功后，各造模組大鼠出現(xiàn)毛發(fā)欠光澤、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、攝食減少等，甚至出現(xiàn)陰囊水腫、腹部腫脹。給藥后，各治療組大鼠較模型組情況好轉(zhuǎn)，模型組未見明顯改善。⑵24小時(shí)尿蛋白定量，模型復(fù)制成功后，各造模組均較正常組明顯升高，差

6、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。灌胃4周后，各治療組較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；降脂通絡(luò)低劑量組與其他治療組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西藥對照組、降脂通絡(luò)中劑量組、降脂通絡(luò)高劑量組比較，未見明顯差異（P>0.05）。⑶模型復(fù)制成功后，各造模組血總蛋白和血白蛋白均較正常組明顯降低、血總膽固醇和血甘油三酯均較正常組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。灌胃4周后，各治療組血總蛋白和血白蛋白

7、較模型組顯著升高、血總膽固醇和血甘油三酯較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；降脂通絡(luò)低劑量組與其他治療組比較，血總蛋白和血白蛋白明顯降低、血總膽固醇和血甘油三酯明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西藥對照組、降脂通絡(luò)中劑量組、降脂通絡(luò)高劑量組兩兩比較，血總蛋白、血白蛋白、血總膽固醇、血甘油三酯均未見明顯差異（P>0.05）。⑷各組大鼠之間血肌酐、血尿素氮相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。⑸正常組大

8、鼠無明顯的改變。模型組大鼠光鏡下腎小球體積、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞核均明顯增大，腎小球基底膜呈彌漫性增厚，系膜基質(zhì)增生；免疫熒光可見lgG和C3呈顆粒狀沿著毛細(xì)血管袢及系膜區(qū)彌漫性沉積；電鏡下腎小球基底膜不規(guī)則增厚，上皮下大量電子致密物沉積，足突廣泛融合或消失，釘突形成。各治療組與模型組比較，病理改變輕微，其中降脂通絡(luò)低劑量組病理改變介于模型組與其他治療組之間，其他治療相比未見明顯差異。⑹α-actinin-4、ZO-1均主要表達(dá)于腎小球，沿

9、毛細(xì)血管袢呈點(diǎn)線狀分布，其中α-actinin-4在模型組較正常組表達(dá)增多，ZO-1模型組較正常組表達(dá)減少。各造模組與正常組相比，α-actinin-4的表達(dá)水平均增強(qiáng)、ZO-1的表達(dá)水平均減弱（P<0.05）；各治療組與模型組相比，α-actinin-4的表達(dá)水平均減弱、ZO-1的表達(dá)水平均增強(qiáng)（P<0.05）；降脂通絡(luò)低劑量組與其他治療組比較，α-actinin-4的表達(dá)水平均增強(qiáng)、ZO-1的表達(dá)水平均減弱（P<0.05）；西藥對照

10、組、降脂通絡(luò)中劑量組、降脂通絡(luò)高劑量組兩兩比較，α-actinin-4、ZO-1的表達(dá)水平未見明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。⑺各造模組與正常組相比，α-actinin-4 mRNA的表達(dá)水平均有上調(diào)， ZO-1 mRNA的表達(dá)水平均下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；各治療組與模型組相比，α-actinin-4 mRNA的表達(dá)水平均有下調(diào)，ZO-1 mRNA的表達(dá)水平均上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；降脂通絡(luò)低

11、劑量組與其他治療組比較，α-actinin-4 mRNA的表達(dá)水平均有上調(diào)，ZO-1 mRNA的表達(dá)水平均下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西藥對照組、降脂通絡(luò)中劑量組、降脂通絡(luò)高劑量組兩兩比較，α-actinin-4 mRNA、ZO-1 mRNA的表達(dá)水平未見明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：①降脂通絡(luò)軟膠囊可明顯升高膜性腎病大鼠的血總蛋白、血白蛋白水平，顯著降低膜性腎病大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量、血總