過表達Mfn2抑制缺血缺氧-再灌注引起的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細胞增殖.pdf

1、目的：腦梗死晚期形成的致密膠質(zhì)瘢痕是神經(jīng)元修復及軸突再生的重要危險因子。線粒體融合蛋白2（Mfn2）亦被稱為增值抑制基因蛋白，具有在體內(nèi)外抑制增殖通路信號轉(zhuǎn)導及細胞周期進展，從而拮抗細胞增值促進細胞凋亡的作用。本實驗探討在體外無糖無血清/再灌注（OGD/R）模型中Mfn2在星形膠質(zhì)細胞中的作用。
　　方法：實驗分為缺血缺氧/再灌注0h組、缺血缺氧/再灌注6h組、缺血缺氧/再灌注12h組和缺血缺氧/再灌注24h組；在缺血缺氧/再灌注

2、12h純化的星形膠質(zhì)細胞分為 Adv-Mfn2組 Adv-GFP組和對照組。Western-blot檢測 GFAP、Ras-Raf1-ERK1/2、PCNA、CyclinD1及 Mfn2等蛋白的變化情況；流式細胞儀PI單標法檢測星形膠質(zhì)細胞周期進展情況；Edu免疫熒光雙標法檢測細胞活化增殖能力的變化；RT-PCR檢測Mfn2基因RNA變化情況。
　　結(jié)果：星形膠質(zhì)細胞經(jīng)缺血缺氧/再灌注刺激后 GFAP表達持續(xù)上升；Ras-Raf1

3、-ERK1/2通路蛋白、CyclinD1及PCNA表達增高，并于OGD/R12h達到高峰，之后呈下降趨勢；星形膠質(zhì)細胞經(jīng)活化增殖后 G0/G1期比率進行性下降并于OGD/R12h達到最低值，S期及G2/M期細胞數(shù)持續(xù)性增加，并于OGD/R12h達到高峰；mfn2蛋白及 RNA變化趨勢一致并與上述蛋白表達結(jié)果相反。較Adv-GFP組及對照組，高表達mfn2組星形膠質(zhì)細胞的GFAP、Ras-Raf1-ERK1/2、PCNA及 CyclinD

4、1蛋白表達顯著下降，細胞周期及增殖活力顯著受到抑制，而mfn2蛋白及RNA均增高。
　　結(jié)論：星形膠質(zhì)細胞經(jīng)無糖無血清/再灌注刺激后 Ras-Raf1-ERK1/2信號通路激活、細胞周期活化進展，mfn2蛋白及基因表達均受到抑制，從而促使星形膠質(zhì)細胞增殖；高表達mfn2通過抑制Ras-Raf1-ERK1/2通路磷酸化及阻滯細胞周期于G0/G1期進而抑制星形膠質(zhì)細胞增殖從而防止膠質(zhì)瘢痕形成。Mfn2可望作為細胞增殖性疾病防治的新靶點