NGAL、KIM-1、TIMP-2早期診斷膿毒癥大鼠急性腎損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一膿毒癥大鼠急性腎損傷模型制備
　　目的：制備一種簡(jiǎn)單、相對(duì)穩(wěn)定的大鼠膿毒癥急性腎損傷模型。
　　方法：利用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)制備膿毒癥大鼠急性腎損傷模型。健康清潔級(jí)雄性SD大鼠50只隨機(jī)分為3組，①正常對(duì)照組（n=10）:不做任何處理;②盲腸結(jié)扎穿孔組（CLP組，n=20）:參照Rittirsch等的方法進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)。③假手術(shù)組（sham組，n=20）:除了不進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔外，其余操作同CLP組。24h后經(jīng)心臟穿刺

2、留取血檢測(cè)血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平，取腎組織標(biāo)本行蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察腎組織病理改變，sham組、CLP組各留10只大鼠觀察生物學(xué)行為變化及24h、48h的死亡率。根據(jù)肌酐及腎臟病理改變判斷膿毒癥大鼠是否出現(xiàn)急性腎損傷。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：s

3、ham組大鼠麻醉清醒后，活動(dòng)正常，大鼠全部存活，CLP組大鼠清醒后活動(dòng)減少，精神差，24h死亡率為20％，48h死亡率為60％。sham組與正常對(duì)照組相比，各指標(biāo)之間沒有顯著性差異（P＞0.05）;與sham組相比，CLP組大鼠24h時(shí)血Cr、BUN、TNF-α、IL-6的表達(dá)明顯增高(Cr(μmol/L):17.74±1.80比40.96±3.03，BUN(nmol/L):1.35±0.23比2.59±0.28, TNF-α(ng/L

4、):100.81±7.97比239.30±17.57, IL-6(ng/L):76.35±8.94比161.43±14.76，均P＜0.05)。正常對(duì)照組與sham組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯病理改變，腎損傷評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;與sham組比較，CLP組腎組織結(jié)構(gòu)紊亂，可見腎小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡變性、細(xì)胞脫落等變化，損傷程度加重，腎損傷病理評(píng)分升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.48±0.25比2.83±0.27，P＜0.0

5、5）。
　　結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)的膿毒癥致AKI大鼠模型制備成功。2.通過控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品種、年齡及盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化，可制備簡(jiǎn)單穩(wěn)定的膿毒癥大鼠急性腎損傷模型。
　　實(shí)驗(yàn)二 NGAL、KIM-1、TIMP-2對(duì)膿毒癥大鼠AKI的早期預(yù)測(cè)價(jià)值
　　目的：探討NGAL、KIM-1、TIMP-2對(duì)膿毒癥大鼠AKI中的早期預(yù)測(cè)價(jià)值。
　　方法：健康清潔級(jí)雄性SD大鼠108只，隨機(jī)分為三組，正常對(duì)照組(n=12);膿毒癥

6、AKI組（SAKI組，n=48），行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù);假手術(shù)組(sham組，n=48)，除了不進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔外，其余操作同SAKI組。SAKI組、sham組均在制模后設(shè)置6h、12h、18h、24h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)12只大鼠;各時(shí)間點(diǎn)心臟穿刺取血檢測(cè)血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平;膀胱穿刺留取尿液，檢測(cè)尿NGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2水平，光鏡下觀察腎組織病理改變。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比

7、較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;部分?jǐn)?shù)據(jù)采用Pearson方法進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1.各組腎功能變化比較
　　sham組各時(shí)間點(diǎn)血肌酐值、尿素氮值與正常對(duì)照組相比無顯著性差異(P＞0.05);SAKI組術(shù)后6h與sham組相比無顯著性差異(P＞0.05);SAKI組術(shù)后12h血肌酐值、尿素氮值明顯升高，與sham組相比有顯著性差異（P＜0.05），SAKI組血

8、肌酐值、尿素氮值于24h達(dá)峰值，SCr(μmol/L):41.75±4.12，BUN(nmol/L):2.51±0.39，術(shù)后12h、18h與24h比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　2.各組大鼠尿腎損傷標(biāo)志物的變化比較
　　sham組各時(shí)間點(diǎn)尿KIM-1、NGAL、TIMP-2與正常對(duì)照組相比，無顯著性差異（P＞0.05）;SAKI組術(shù)后6h尿KIM-1、NGAL、TIMP-2即升高，與sham組相比有顯著性差異（均P

9、＜0.05）;尿KIM-1術(shù)后12h達(dá)高峰(130.08±10.53(ng/L))，術(shù)后18h、24h有所下降，仍高于sham組(P＜0.05)，術(shù)后6h、12h、18h、24h與正常對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);尿NGAL于CLP術(shù)后18h達(dá)高峰(2979.21±258.91(ng/L))，術(shù)后24h有下降趨勢(shì)，仍高于sham組(P＜0.05)，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)與正常對(duì)照組比較有顯著性差異（均P＜0.05）;尿TIMP-2在CL

10、P術(shù)后12h、18h、24h繼續(xù)升高，24h達(dá)高峰(2241.59±226.45(ng/L))，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)與正常對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。
　　3.各組大鼠腎臟組織病理改變及腎損傷病理評(píng)分
　　sham組和正常對(duì)照組大鼠的腎臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常;腎小管上皮細(xì)胞未見水腫、空泡變性、壞死、脫落，腎小管內(nèi)未見管型形成等改變;SAKI組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)有所改變，可見腎小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡變性、脫落，腎小管內(nèi)有管型

11、形成。
　　sham組各時(shí)間點(diǎn)腎臟組織損傷評(píng)分與正常對(duì)照組相比，無顯著性差異(P＞0.05);SAKI組腎損傷病理評(píng)分在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均升高，隨術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)腎組織損傷程度逐漸加重，與sham組相比有顯著性差異(6h:0.38±0.18比1.03±0.17，12h:0.43±0.24比1.77±0.17，18h:0.42±0.22比2.24±0.28,24h:0.47±0.32比2.89±0.20;均P＜0.05)。
　　4.尿

12、標(biāo)志物與腎損傷評(píng)分相關(guān)性分析
　　尿KIM-1、尿NGAL、尿TIMP-2與大鼠腎損傷病理評(píng)分成正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.638、0.897、0.810，（均P＜0.01），SCr、BUN與大鼠腎損傷病理評(píng)分相關(guān)性分析顯示:相關(guān)系數(shù)分別為0.795、0.638，（均P＜0.01）。
　　結(jié)論:膿毒癥AKI大鼠在CLP術(shù)后6h各尿標(biāo)志物即明顯升高，且早于血肌酐、血尿素氮，尿KIM-1、尿NGAL、尿TIMP-2與膿毒癥大鼠腎損