基于microRNA研究益腎清利活血方對阿霉素腎病大鼠的足細胞保護作用.pdf

1、新近的研究資料表明，中國的慢性腎臟病患者約有1.19億，這對社會經(jīng)濟造成了極大的負擔。其中，腎小球疾病仍是中國慢性腎臟病發(fā)病的主要原因。足細胞的損傷和修復是近年來腎臟病領域的研究熱點。MicroRNA是一組廣泛存在于病毒、動植物及人類的內(nèi)源性小分子，長度約22個核苷酸，具有保守性、基因集簇現(xiàn)象和特異性表達等特點，有研究表明，microRNAs能對基因的表達進行修飾，microRNA的表達失調(diào)與一些主要的慢性腎臟病密切相關。祖國醫(yī)學博大精

2、深，為我們提供了寶貴的理論基礎和豐富的臨床經(jīng)驗，特別是在慢性腎臟病領域，中醫(yī)藥療效確切，有著現(xiàn)代醫(yī)學不可比擬的優(yōu)勢。本文從中藥復方、中藥單體兩個方面研究中醫(yī)藥的足細胞保護作用，分析其足細胞保護的異同點。
　　實驗一:益腎清利活血方對阿霉素腎病大鼠的足細胞保護作用及其對腎組織microRNA表達的影響
　　目的:建立阿霉素腎病大鼠模型，研究益腎清利活血方的足細胞保護作用及其可能的機制。方法:30只健康的雄性Sprague-Da

3、wley大鼠隨機分為3組（正常組、模型組、中藥組）。造模后成功后的第7，28，42，和56天，收集24h的尿液標本。所有的大鼠在造模后第56天宰殺，收集其血液標本和腎組織，分別檢測24h尿蛋白定量;肝腎功能;光鏡下觀察腎組織病理變化;免疫組化、west-blot法檢測腎組織nephrin蛋白的表達。用生物芯片技術對腎皮質的miRNA表達進行分析。結果:益腎清利活血方能改善阿霉素腎病大鼠的尿蛋白，減輕腎臟的病理損傷，上調(diào)腎組織中nephr

4、in蛋白的表達，改善腎臟功能;與正常組相比，阿霉素腎病大鼠模型的腎組織中miRNA-494-5p、miRNA-1249、miRNA-3596c表達是上調(diào)的，miRNA-582-5p的表達是下調(diào)的，經(jīng)益腎清利活血方治療后，上調(diào)的miRNA-494-5p、miRNA-1249、miRNA-3596c的表達能得到抑制，而下調(diào)的miRNA-582-5p的表達能得到增強。結論:益腎清利活血方可能通過調(diào)節(jié)miRNA-494-5p、miRNA-124

5、9、miRNA-3596c、miRNA-582-5p的表達發(fā)揮其足細胞保護作用的。
　　實驗二:雷公藤甲素對阿霉素腎病大鼠的足細胞保護作用及其對腎組織microRNA表達的影響
　　目的:建立阿霉素腎病大鼠模型，研究雷公藤甲素的足細胞保護作用及其可能的機制。方法:30只健康的雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分為3組（正常組、模型組、雷公藤甲素組）。造模后成功后的第7，28，42，和56天，收集24h的尿液標本。所有的

6、大鼠在造模后第56天宰殺，收集其血液標本和腎組織用于生化檢測和分子生物學檢測。用生物芯片技術對腎皮質的miRNA表達進行分析，并用RT-PCR法反向驗證差異性表達的miRNAs。結果:雷公藤甲素能減少蛋白尿，改善腎功能，減輕腎組織的病理損害，且沒有明顯的肝臟副作用;與正常組相比，阿霉素腎病大鼠模型中miR-344-3p、miR-30b-3p表達是上調(diào)的，而雷公藤甲素能抑制miR-344-3p、miR-30b-3p表達的上調(diào)。結論:雷公藤

7、甲素可能通過調(diào)節(jié)miR-344-3p、 miR-30b-3p的表達發(fā)揮其足細胞保護作用。
　　實驗三:益腎清利活血方與雷公藤甲素對阿霉素腎病大鼠療效的比較
　　目的:建立阿霉素腎病大鼠模型，研究益腎清利活血方、雷公藤甲素的足細胞保護作用，并對兩者療效進行比較。方法:40只健康的雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分為4組（正常組、模型組、中藥組、雷公藤甲素組）。造模后成功后的第7，28，42，和56天，收集24h的尿液標

8、本。所有的大鼠在造模后第56天宰殺，收集其血液標本和腎組織，分別檢測24h尿蛋白定量;肝腎功能;光鏡、電鏡下觀察腎組織病理變化;免疫組化、west-blot法檢測腎組織nephrin蛋白的表達;RT-PCR法檢測腎組織中nephrin核酸的表達。結果:益腎清利活血方、雷公藤甲素均能減少蛋白尿，改善腎功能，減輕腎組織的病理損害，且沒有明顯的肝臟副作用。與雷公藤甲素相比，中藥益腎清利活血方能提高阿霉素腎病大鼠的血清白蛋白水平。結論:益腎清利