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1、本文以酪氨酸酶抑制率和DPPH自由基清除率的綜合評(píng)分為指標(biāo),對(duì)當(dāng)歸補(bǔ)血湯中的美白活性物進(jìn)行提取、純化和安全性評(píng)價(jià),并進(jìn)一步探討其對(duì)酪氨酸酶抑制作用的類型和美白機(jī)理,最后對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的應(yīng)用研究,為天然中藥復(fù)方美白劑的開發(fā)和推廣提供了基礎(chǔ)思路和理論依據(jù)。本文研究?jī)?nèi)容如下:
1)以綜合評(píng)分為指標(biāo),運(yùn)用均勻設(shè)計(jì)法探索當(dāng)歸補(bǔ)血湯美白功效的最佳藥效配比。結(jié)果顯示,基于美白功效,當(dāng)歸補(bǔ)血湯的配伍最佳劑量組合為黃芪-當(dāng)歸(1:7),對(duì)酪氨酸酶
2、活性的抑制率89.65%,對(duì)DPPH自由基的清除率90.96%。
2)以綜合評(píng)分為指標(biāo),運(yùn)用單因素試驗(yàn)考察料液比、提取溶劑和提取溫度對(duì)綜合評(píng)分的影響,再建立三因素三水平響應(yīng)面分析試驗(yàn),進(jìn)行多元回歸擬合分析優(yōu)選出當(dāng)歸補(bǔ)血湯美白活性物最佳的提取工藝為:料液比1:12 g/mL,乙醇濃度為65%,提取溫度為92℃。通過驗(yàn)證試驗(yàn),實(shí)際值與模型預(yù)測(cè)的理論值基本相符。
3)采用大孔樹脂吸附法對(duì)所提取得到的當(dāng)歸補(bǔ)血湯美白活性物進(jìn)行
3、純化,確定最優(yōu)純化工藝為:上樣濃度0.4 g/mL,藥液pH為3,洗脫劑70%乙醇,洗脫劑pH為9,洗脫速度2 mL/min,洗脫量200 mL。通過離體牛眼角膜濁度法和RBC溶血試驗(yàn)對(duì)當(dāng)歸補(bǔ)血美白素進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,在牛眼角膜濁度試驗(yàn)中,所得IVIS值均小于0,刺激性結(jié)果為溫和,不具有眼刺激性。RBC溶血試驗(yàn)中,半數(shù)溶血率HC50=0.0308 g/mL,可認(rèn)為當(dāng)歸補(bǔ)血美白素?zé)o刺激性。
4)通過動(dòng)力學(xué)分析,當(dāng)歸補(bǔ)血湯
4、美白活性物對(duì)單酚酶基本沒有抑制作用;對(duì)二酚酶是可逆性抑制,其半數(shù)抑制濃度為311.24 mg/mL。利用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法試驗(yàn)分析得出抑制常數(shù)KI和KIS分別為0.0048 mg/mL和0.0062 mg/mL,可確定當(dāng)歸補(bǔ)血湯美白活性物的抑制類型為混合型抑制。
5)在基質(zhì)配方的基礎(chǔ)上,探討乳化劑和增稠劑兩個(gè)體系以及當(dāng)歸補(bǔ)血美白素的添加量對(duì)膚感和穩(wěn)定性的影響,從而研制當(dāng)歸補(bǔ)血美白霜,并進(jìn)行人體皮膚斑貼實(shí)
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