TRPV4通道在正常及高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用及其可能機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討TRPV4通道是否參與正常及高血壓大鼠的心肌缺血再灌注損傷，并對(duì)其可能機(jī)制進(jìn)行初步研究。
　　方法：(1)選取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠并運(yùn)用“兩腎一夾”方法制備高血壓大鼠模型。健康(normal, n)SD大鼠/高血壓(hypertensive, h)大鼠均分別隨機(jī)分為缺血/再灌注(nI/R/hI/R)組、TRPV4抑制劑(nRN1734/hRN1734)組和 TRPV4激動(dòng)劑(nRN1734/hRN

2、1747)組(每組n=6)。(2)采用langendorff離體心臟灌流裝置對(duì)上述各組大鼠離體心臟進(jìn)行灌流。nI/R/hI/R組在平衡灌流20 min后，全心缺血30 min，復(fù)灌120min；nRN1734/hRN1734組在復(fù)灌前5 min給予特異性TRPV4抑制劑RN1734(10μM)，其余處理同 nI/R/hI/R組；nRN1734/hRN1747組在復(fù)灌前5 min給予特異性TRPV4激動(dòng)劑RN1747(10μM)，其余處理

3、同nI/R/hI/R組。Powerlab生物信號(hào)處理系統(tǒng)記錄各組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，收集并測(cè)量各組冠脈流出液(coronary flow，CF)每分鐘流量，并檢測(cè)灌流液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量，用TTC染色法分析心臟梗死面積；免疫組化及western blotting法檢測(cè)TRPV4蛋白在各組大鼠心肌組織中的表達(dá)差異。檢測(cè)TRPV4開(kāi)放時(shí)心肌細(xì)胞內(nèi)ROS及Ca2+含量的變化
　　結(jié)果：(1)成功制備了“兩腎一夾”高血壓大鼠模型。造

4、模術(shù)后7天、14天，大鼠與造模前相比血壓明顯升高，且差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。(2)與單純?nèi)毖?再灌注相比，TRPV4通道開(kāi)放使正常大鼠及高血壓大鼠缺血后再灌注期左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室壓最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、心率(HR)及冠脈流量(CF)的恢復(fù)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，而心肌梗死面積和乳酸脫氫酶含量明顯減小(P<0.01)。(3)免疫組化及Western blotti

5、ng結(jié)果顯示高血壓大鼠心肌上TRPV4蛋白的表達(dá)高于正常大鼠(P<0.05)；與單純?nèi)毖俟嘧⒈龋琓RPV4激動(dòng)劑RN1747可使正常和高血壓大鼠心肌TRPV4表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)，而TRPV4抑制劑RN1734可使TRPV4表達(dá)減少(P<0.05)。(4)與對(duì)照組相比，TRPV4通道的開(kāi)放引起心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加、ROS生成減少(P<0.05)。
　　結(jié)論：TRPV4通道開(kāi)放對(duì)正常及高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷有保護(hù)作