艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的線粒體機制研究.pdf

1、艾葉，是一味常用中藥，傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為其味辛、苦，性溫，歸肝、脾、腎經(jīng)，有小毒。艾葉的化學(xué)成分比較復(fù)雜，主要含有揮發(fā)油、多糖、黃酮類、鞣質(zhì)、微量元素等多種成分，這些成分既可能是其發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，也可能是其產(chǎn)生毒理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)?，F(xiàn)代研究已經(jīng)證實：揮發(fā)油是艾葉導(dǎo)致急性肝毒性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，氧化應(yīng)激所致的肝細胞損傷可能是其主要發(fā)生途徑；而肝細胞線粒體功能障礙是藥物誘發(fā)肝損傷的主要機制。因此，有必要深入研究艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的線粒體

2、機制。
　　目的：
　　通過氧化應(yīng)激、肝細胞線粒體結(jié)構(gòu)和功能障礙方面探討艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的線粒體機制。
　　方法：
　　1. ICR小鼠70只，SPF級，體重為20±2 g，雌雄各半，隨機分為7組，分別是0 g?kg-1（溶媒組），2.2 g?kg-1，2.5 g?kg-1，2.8 g?kg-1，3.2 g?kg-1，3.7 g?kg-1，4.2 g?kg-1，組間距為1:0.88，灌胃容量為0.2 mL?1

3、0g-1，給藥后連續(xù)觀察14天，記錄動物死亡比率，根據(jù)改良寇氏法計算艾葉揮發(fā)油的半數(shù)致死量（LD50）及其95％的可信區(qū)間。
　　2. ICR小鼠，52只，SPF級，體重為20±2 g，雌雄各半，隨機分為5組，分別為空白對照組（溶媒組，A組）、2.5 g?kg-1四氯化碳組（陽性對照組，B組）、1.9 g?kg-1艾葉揮發(fā)油組（C組）、2.3 g?kg-1艾葉揮發(fā)油組（D組）、2.7 g?kg-1艾葉揮發(fā)油組（E組），灌胃容量為0

4、.2 mL?10g-1，在給藥后6 h，眼眶靜脈叢取血，全自動生化分析儀檢測ALT、AST、ALP、TB了解肝功能的變化；肝臟組織采用H.E.染色，光鏡觀察肝臟病理組織學(xué)變化，Ridit分析評價肝臟病理組織學(xué)變化；黃嘌呤氧化酶法檢測肝臟組織SOD，硫代巴比妥酸法檢測肝臟組織MDA，化學(xué)比色法檢測肝臟組織GSH和GSSG，分光光度計法檢測肝臟組織抗超氧陰離子自由基及產(chǎn)生超氧陰離子自由基；差速離心法提取肝臟組織線粒體，JC-1熒光探針法檢測

5、線粒體膜電位，分光光度計法檢測線粒體腫脹敏感性，定磷法檢測ATP酶活力。
　　結(jié)果：
　　1.艾葉揮發(fā)油的LD50為3.13 g?kg-1；平均可信限為0.44 g?kg-1，其95%可信限區(qū)間為2.91~3.35 g?kg-1。
　　2.與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油給藥6 h后，血清ALT、AST、ALP含量具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），血清TB含量無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油

6、組間比較，血清ALT、AST、ALP也均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），并且是隨著劑量的增加呈增加趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油給藥6 h后對小鼠肝臟組織損傷具有顯著性的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間的肝臟組織損傷比較也具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），并且隨劑量的增加，對肝臟組織的損傷呈上升趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油給藥6 h后均能引起小鼠肝臟組織中MDA含量具有顯著的統(tǒng)

7、計學(xué)差異（P＜0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間比較，小鼠肝臟組織中MDA含量也均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），并且隨著劑量的增大，MDA的含量呈增加趨勢。與空白對照組比較，艾葉揮發(fā)油D組、E組在給藥6 h后肝臟組織中SOD活力具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），C組在給藥6 h后肝臟組織SOD活力無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間比較肝臟組織SOD活力具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），并且隨劑量的增

8、加呈增加趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油組小鼠肝臟組織中的GSH和GSSG含量具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），隨著艾葉揮發(fā)油劑量的增大，小鼠肝臟組織中的GSH含量呈降低趨勢，而GSSG的呈增加趨勢；不同劑量艾葉揮發(fā)油組間比較，肝臟組織中的GSH和GSSG含量具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油組產(chǎn)生超氧陰離子自由基活力具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間

9、比較，產(chǎn)生超氧陰離子自由基活力也均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），并且隨著劑量的增加呈增加趨勢。
　　3.與空白對照組比較，不同劑量艾葉揮發(fā)油引起小鼠肝臟組織線粒體膜電位變化具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；不同劑量艾葉揮發(fā)油組間比較引起小鼠肝臟組織線粒體膜電位變化具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），隨著劑量增加膜電位呈下降趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油ΔA540nm的變化具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.0

10、5）；不同劑量艾葉揮發(fā)油組間比較ΔA540nm變化具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），并且隨著艾葉揮發(fā)油的劑量的增加呈下降趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油組對線粒體Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影響具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；艾葉揮發(fā)油不同劑量組間比較對Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影響具有顯著的統(tǒng)

11、計學(xué)差異（P＜0.05），即隨著艾葉揮發(fā)油的劑量增加，Na+-K+-ATP酶、、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力表現(xiàn)為不同程度的抑制；艾葉揮發(fā)油不同劑量組間比較對線粒體Mg2+-ATP酶活力影響無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）
　　結(jié)論：
　　1.艾葉揮發(fā)油具有急性肝毒性，其急性肝毒性可能直接或者間接由肝細胞損傷誘發(fā)。
　　2.艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的機制可能與氧化應(yīng)激相關(guān)。
　　3.艾葉揮發(fā)油急性