基于TGF-β-Smads信號通路研究鐮形棘豆提取物對腎間質(zhì)纖維化的作用及機制.pdf

1、目的：通過觀察鐮形棘豆提取物含藥血清對轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）轉(zhuǎn)分化的作用，探討其在腎間質(zhì)纖維化方面的作用及機制。
　　方法：采用鐮形棘豆提取物（300mg/kg）給大鼠灌胃，每天2次，連續(xù)3天。3天后大鼠股動脈采血，分離血清，即得鐮形棘豆提取物含藥血清。體外培養(yǎng)HK-2細(xì)胞，培養(yǎng)基為含10％胎牛血清的DMEM/F12（1:1）；細(xì)胞分為4組：空白對照組、空白血清對照組（TGF-β110n

2、g/ml+10%空白血清）、鐮形棘豆提取物含藥血清組（TGF-β110ng/ml+10%鐮形棘豆提取物含藥血清）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1誘導(dǎo)組（TGF-β110ng/ml）。藥物干預(yù)細(xì)胞24h后，采用免疫組化技術(shù)檢測α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和E-鈣粘蛋白（E-cadherin）的表達(dá)，ELISA技術(shù)測Ⅰ型膠原（ColⅠ）、Ⅲ型膠原（ColⅢ）和纖連蛋白（FN）的含量，熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β受體I（TβRI）、受體II（T

3、βRII）的mRNA表達(dá)，Western blot檢測Smad2、smad3的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：正常的HK-2細(xì)胞只表達(dá)E-cadherin，不表達(dá)α-SMA，但經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，E-cadherin的表達(dá)減弱，α-SMA表達(dá)增強。藥物干預(yù)后，α-SMA表達(dá)明顯減弱，E-cadherin表達(dá)增強。與空白對照組相比，TGF-β1誘導(dǎo)組ColⅠ、ColⅢ、FN的含量顯著增加，與TGF-β1誘導(dǎo)組相比，鐮形棘豆提取物含

4、藥血清組ColⅠ、ColⅢ、FN的分泌顯著下降，72h時作用更為顯著。與空白對照組相比，TGF-β1誘導(dǎo)組TβRI、TβRII的mRNA表達(dá)和Smad2、Smad3的蛋白表達(dá)顯著上升；與TGF-β1誘導(dǎo)組相比，鐮形棘豆提取物含藥血清組TβRI、TβRII mRNA表達(dá)和Smad2、Smad3蛋白表達(dá)減少?？瞻籽鍎t無此作用。
　　結(jié)論：鐮形棘豆提取物能夠抑制腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，減少細(xì)胞外基質(zhì)成分分泌，調(diào)控Smads信號通路，在一