表皮葡萄球菌耐藥譜、毒力基因檢測(cè)及分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　葡萄球菌由于其較強(qiáng)的致病性以及對(duì)常用抗菌藥物較高的耐藥率，一直被認(rèn)為是引起醫(yī)院和社區(qū)感染的重要病原菌。表皮葡萄球菌（StaphylococcusEpidermidis，SE）作為葡萄球菌家族中的一員，近些年逐漸成為醫(yī)療相關(guān)感染（healthcare-associated infection，HAI）的重要病原菌之一，特別是引起生物植入物相關(guān)的感染，在植入物表面易形成生物膜，使其致病性和耐藥性增強(qiáng)。本研究旨在于了解溫州地

2、區(qū)分離的表皮葡萄球菌對(duì)常用的抗菌藥物的耐藥譜、攜帶的毒力基因及分子流行病學(xué)特征。
　　方法：
　　收集溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2002年-2008年及2012年-2014年從臨床各種標(biāo)本中分離的表皮葡萄球菌，同一個(gè)患者的相同部位分離的菌株選取首次分離株，共1018株。用革蘭染色、觸酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)和VITEK全自動(dòng)微生物分析儀對(duì)細(xì)菌進(jìn)行菌種鑒定。同時(shí)收集無泌尿系統(tǒng)疾病的不育癥患者尿道口表皮葡萄球菌正常定植株，菌種的鑒定采用

3、PCR技術(shù)擴(kuò)增細(xì)菌的16SrRNA，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)序結(jié)果通過NCBI網(wǎng)站的Blastn程序在線比對(duì)，鑒定細(xì)菌為表皮葡萄球菌，共106株。采用PCR技術(shù)擴(kuò)增mecA、icaA、aap和sesⅠ基因進(jìn)行耐甲氧西林表皮葡萄球菌（methicillin-resistant StaphylococcusEpidermidis，MRSE）的篩選和毒力基因的檢測(cè);采用K-B紙片法及E-test法對(duì)表皮葡萄球菌進(jìn)行10種常用抗菌藥物

4、的藥物敏感性試驗(yàn);應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型(Multi Locus Sequence Typing，MLST)技術(shù)和eBURST軟件對(duì)表皮葡萄球菌進(jìn)行序列分型和親緣性分析。
　　結(jié)果：
　　1018株臨床分離株中，848株為mecA陽性，判斷為MRSE，陽性率為83.30％;106株定植株中，63株為mecA陽性，判斷為MRSE，陽性率為59.43％。臨床分離株MRSE檢出率高于正常定植株。1018株臨床分離株icaA、aap和s

5、esⅠ毒力基因的陽性率分別為28.49％、68.47％和16.70％，而定植株icaA、aap和sesⅠ基因的陽性率分別為22.64％、57.55％和3.77％。臨床分離株aap和sesⅠ毒力基因的陽性率明顯高于正常定植株，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)隨機(jī)挑選的457株臨床分離株和106株正常定植株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)所有細(xì)菌對(duì)萬古霉素敏感，臨床分離株對(duì)青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、氯霉素、慶大霉素、克林霉素、紅霉素、復(fù)方新諾明以及利奈唑胺的耐藥

6、率較正常定植株高。逐年分析臨床分離株對(duì)抗菌藥物耐藥率的變化發(fā)現(xiàn)，臨床分離株對(duì)青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、氯霉素、慶大霉素以及復(fù)方新諾明的耐藥率總體呈下降趨勢(shì)，對(duì)克林霉素和紅霉素的耐藥率呈上升趨勢(shì)。457株臨床分離株中總共發(fā)現(xiàn)76個(gè)ST型，主要為ST2(62/457，13.57％)，其次為ST466(53/457,11.60％)、ST59(28/457,6.13％)、ST130(26/457,5.69％)、ST20(25/457,5.47％

7、)、ST210(19/457,4.16％)、ST125(14/457,3.06％)、ST14(12/457，2.63％)和ST235(11/457，2.41％);106株定植株中發(fā)現(xiàn)了32個(gè)ST型，主要為ST130(19/106，17.92％)、ST466(16/106，15.09％)和ST20(14/106，13.21％)。臨床分離株與定植株的主要ST型不同。比較主要ST型菌株的耐藥譜，發(fā)現(xiàn)ST2型菌株的耐藥譜較ST466型、ST13

8、0型、ST20型和ST59型菌株的耐藥譜廣，ST2型菌株對(duì)青霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素、克林霉素、紅霉素以及復(fù)方新諾明的耐藥率均較高，其他主要ST型菌株僅對(duì)2-3個(gè)抗菌藥物的耐藥率較高。比較主要ST型菌株icaA、aap和sesⅠ毒力基因攜帶率，發(fā)現(xiàn)不同ST型菌株攜帶的毒力基因譜明顯不同，ST2型菌株三種毒力基因攜帶率均超過90％;而ST130型菌株3種毒力基因的攜帶率均較低;ST20型菌株icaA和aap攜帶率超過90％，而sesⅠ攜帶

9、率只有2.56％; ST466和ST59型菌株aap攜帶率超過90％，其他2種毒力基因的攜帶率較低。對(duì)本研究表皮葡萄球菌的ST型進(jìn)行eBURST分析，75.49％(345/457)的臨床分離株和72.64％(77/106)的定植株屬于CC2，臨床分離株中還發(fā)現(xiàn)了7個(gè)次要的CC，包括CC365、CC193、CC227、CC171、CC33、CC326以及CC66，占7.88％(36/457)，正常定植株中還發(fā)現(xiàn)了CC365、CC193、C

10、C227和CC66。發(fā)現(xiàn)臨床分離株的起源(Founder)是ST5，表皮葡萄球菌全球數(shù)據(jù)庫中的Founder為ST2，而ST5是屬于CC2;定植株的Founder是ST85，同樣屬于CC2。臨床分離株與定植株的Founder均屬于CC2。
　　結(jié)論：
　　1.表皮葡萄球菌臨床分離株耐藥率和毒力基因攜帶率比正常定植株更高。
　　2.表皮葡萄球菌臨床分離株與正常定植株ST型不同，但大部分同屬于CC2群。
　　3.不同