OSR1在乳腺癌中的表達特征及其臨床意義的初步研究.pdf

1、目的：研究OSR1基因在乳腺癌中的表達水平；探討乳腺癌中OSR1基因的啟動子甲基化情況；觀察OSR1基因?qū)θ橄侔┘毎麗盒员硇偷挠绊?；初步分析OSR1蛋白表達水平與乳腺癌各臨床指標(biāo)的關(guān)聯(lián)。
　　方法：利用Oncomine數(shù)據(jù)庫中所有可供在線分析的乳腺癌芯片數(shù)據(jù)集研究OSR1基因在mRNA水平的改變；利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)在20例乳腺癌組織及其配對的相鄰正常乳腺組織上檢測 OSR1基因的蛋白表達變化；利用 GEO數(shù)據(jù)庫下載合適的乳腺

2、癌甲基化芯片數(shù)據(jù)集（GSE32393），分析 OSR1基因在乳腺癌組織中的啟動子甲基化情況；利用 UCSC基因組瀏覽平臺上已注釋的來自ENCODE協(xié)作組的甲基化芯片數(shù)據(jù)，分析OSR1基因在乳腺癌細胞系中的啟動子甲基化情況；利用去甲基化藥物5-氮雜胞苷(5-Aza)處理人乳腺癌細胞MCF-7，然后采用半定量PCR技術(shù)對比處理前后OSR1基因的表達變化；利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定過表達 OSR1基因的 MCF-7細胞，然后采用 CCK8細胞

3、增殖試驗及 Annexin V-PE/7-AAD凋亡試驗分別檢測細胞的增殖及凋亡改變；利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測97例乳腺癌組織中OSR1基因的蛋白表達水平，并收集相應(yīng)病人的各項臨床指標(biāo)，采用卡方檢驗方法分析OSR1基因的表達水平與臨床指標(biāo)間的關(guān)聯(lián)，初步分析其潛在的臨床價值。
　　結(jié)果：根據(jù)芯片數(shù)據(jù)分析和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，OSR1基因在乳腺癌中的mRNA和蛋白的表達，均較正常乳腺組織低；針對乳腺癌細胞系及乳腺癌組織的生物信息

4、學(xué)分析顯示OSR1基因啟動子甲基化是其表達下降的原因之一；經(jīng)5-Aza處理后的MCF-7細胞提高了OSR1基因的表達；穩(wěn)定過表達OSR1基因的MCF-7細胞增殖速度下降，凋亡增加；統(tǒng)計學(xué)顯示乳腺癌中OSR1的蛋白表達水平與Ki-67增殖指數(shù)存在接近顯著的關(guān)系(P=0.059)。
　　結(jié)論：OSR1基因通過啟動子的甲基化在乳腺癌中表達下調(diào)；OSR1基因在 MCF-7中表現(xiàn)出抑癌的生物功能；OSR1的蛋白水平未見與乳腺癌各臨床指標(biāo)有顯