HPV6b,11E7蛋白多克隆抗體免疫組化法診斷臨床疑似尖銳濕疣的意義探討.pdf

1、目的:
　　尖銳濕疣(condyloma acuminatum，CA)是由人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染所引起的性傳播疾病，近年來的發(fā)病率居高不下，目前在我國性傳播疾病中位居第二。典型的CA診斷并不困難，但是臨床上仍有一些臨床表現(xiàn)不典型的CA，即使皮損行組織病理活檢表現(xiàn)仍不典型，給明確診斷和進一步治療帶來了一定困難。尋找高效簡便易行的HPV檢測手段將有助于CA的診斷和治療。本文采用自行制備的人乳

2、頭瘤病毒HPV6b，11型E7蛋白多克隆抗體作為特異性抗體，通過免疫組化方法檢測臨床疑似尖銳濕疣皮損活檢標本中的HPV6bE7及11E7蛋白的表達，回顧性分析臨床疑似尖銳濕疣的石蠟標本的HPV6b、11型檢出率，以及與組織病理診斷的符合率。旨在探討該二個蛋白多克隆抗體應用于疑似尖銳濕疣診斷的可行性及優(yōu)勢，并試圖闡述其應用前景。
　　方法:
　　共收集2011年1月-2014年8月期間于浙江大學附屬邵逸夫醫(yī)院皮膚科門診就診的、

3、臨床表現(xiàn)為外生殖器部位不典型贅生物的手術活檢標本41例?；仡櫡治龌颊呋拘畔⑷缒挲g、性別以及臨床病損、組織病理學特點。
　　以自行制備的HPV6b，11型E7蛋白兔多克隆抗體作為特異性抗體的免疫組化法檢測病損組織中的HPV6bE7及11E7蛋白的表達，根據(jù)陽性細胞的著色強度以及陽性細胞所占的百分數(shù)綜合評定，進行半定量評級。統(tǒng)計分析該兩抗體對臨床表現(xiàn)不典型尖銳濕疣標本的HPV病毒的陽性檢測率以及與臨床診斷和病理診斷的符合情況。統(tǒng)計分

4、析表皮各層中陽性表達細胞分布，t檢驗分析表皮備層中陽性表達細胞密度的差異。
　　結(jié)果:
　　回顧分析了41例臨床疑似尖銳濕疣的皮損進行的常規(guī)組織病理檢查，其中29例皮損可見典型的CA病理改變，余下12例皮損的組織病理表現(xiàn)則缺乏典型CA的改變，僅表現(xiàn)為乳頭瘤樣增生或棘層肥厚。
　　實驗結(jié)果顯示，41例皮損標本中，HPV6bE7蛋白陽性表達為34例(即HPV6b型陽性感染率82.93％)，HPV11E7蛋白陽性表達為27例

5、(即HPV11型陽性感染率65.85％)，HPV6bE7和HPV11E7蛋白總陽性表達38例（即HPV6b和11型總陽性感染率為92.68％）。其中兩E7蛋白雙陽性表達的皮損組織為23例(即HPV6b型和11型雙陽性率為56.10％，提示存在該兩型病毒合并感染的病例占56.10％)，兩E7蛋白表達均陰性的皮損共3例（即該兩型HPV感染雙陰性率7.32％）。其中陽性表達細胞主要分布于棘層及基底層，在顆粒層相對較少。
　　在12例組織

6、病理無典型CA表現(xiàn)的皮損中，HPV6bE7蛋白陽性表達占10例(即提示HPV6b陽性感染率83.33％)，HPV11E7蛋白陽性表達6例（即HPV11陽性感染率為50.00％）;兩E7蛋白雙陽性表達5例(提示該兩型病毒合并感染的病例占41.67％)，兩E7蛋白總陽性表達11例(即HPV6b型和11型總陽性感染率為91.67％)，雙陰性表達1例（即該兩型HPV感染陰性率為8.33％）。
　　討論:
　　HPV6b/11E7蛋白

7、多克隆抗體作為特異性抗體對臨床可疑CA標本進行的免疫組化染色檢測發(fā)現(xiàn)，HPV6b與11型的陽性感染率分別為82.93％和65.85％，，與PCR方法檢測HPV的陽性率基本相符。兩個HPV的E7蛋白表達總陽性率為92.68％，據(jù)文獻報道，PCR方法檢測結(jié)果表明尖銳濕疣中超過90％是由HPV6型和HPV11型感染引起的，本實驗結(jié)果與之亦符合。
　　41例皮損中，HPV6bE7表達陽性而HPV11E7表達陰性的皮損有11例，HPV6bE

8、7表達陰性而HPV11E7表達陽性的皮損則有4例，表明該兩抗體在免疫組化檢測中沒有交叉反應。綜上可知該二型抗體免疫組化檢測對HPV6b/11E7蛋白的檢出率高，敏感性好，特異性強。
　　實驗結(jié)果陽性表達細胞主要分布于棘層及基底層，在顆粒層相對較少，則考慮與HPV的生活周期有關。
　　12例組織病理無典型CA表現(xiàn)的疑似CA標本中，僅有1例HPV6bE7及11E7蛋白表達均為陰性，HPV6bE7及11E7蛋白的總檢出率高達91.

9、67％。提示在這些臨床表現(xiàn)、病理組織改變均不典型的疑似CA中，亦有90％以上是由HPV6b型和/或HPV11型感染致病的。對臨床表現(xiàn)及病理組織改變均缺乏典型表現(xiàn)的疑似CA以該方法進行檢測，可確診由該二型HPV感染引起的CA，能顯著提高診斷率。
　　本實驗使用的自行制備的HPV6bE7和11 E7抗體對臨床疑似尖銳濕疣標本的免疫組化染色的陽性率顯著高于文獻報道的HPV L1殼蛋白抗體免疫組化染色法;相較于其他檢測HPV的分子檢測手段

10、，免疫組化有著操作簡便，設備及實驗室要求低，檢測所需時間較短，價格相對便宜等優(yōu)勢。
　　結(jié)論:
　　1.以自行研發(fā)制備的HPV6b，11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化法檢測對皮損中HPV6bE7/11E7蛋白陽性檢出率高，敏感性高，特異性強。
　　2.相較于PCR、DNA印跡雜交、原位雜交技術等特異性較高的檢測方法，本方法具有操作簡便、操作及設備要求均較低、價格經(jīng)濟等優(yōu)點。
　　3.對于通過組織病理活檢仍不能明確診