青藤堿誘導(dǎo)的imDC對同種異基因大鼠腎移植外周血Th1-Th2細(xì)胞因子的影響.pdf

1、【目的】通過將經(jīng)青藤堿誘導(dǎo)的imDC輸注入受體大鼠，觀察五組受體鼠靜脈血Th1/Th2細(xì)胞因子的變化，通過研究青藤堿誘導(dǎo)的imDC對Th1/Th2細(xì)胞因子的影響，來探討青藤堿誘導(dǎo)的imDC誘導(dǎo)移植免疫耐受的機(jī)制，為青藤堿應(yīng)用于誘導(dǎo)腎移植免疫耐受提供理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　【方法】取wisatr大鼠骨髓來源前體細(xì)胞，將其分為A、B兩組，A組為常規(guī)誘導(dǎo)組，即應(yīng)用含10％FBS、10ng/ml的IL-4和10ng/ml的GM-CSF誘

2、導(dǎo)wisatr大鼠骨髓細(xì)胞,B組為青藤堿誘導(dǎo)組，第一天加入100UM的青藤堿，余同A組,培養(yǎng)出大量未成熟樹突狀細(xì)胞，觀察細(xì)胞生長情況，流式檢測細(xì)胞表型。近交系SD大鼠作為受體；近交系Wistar大鼠為供體，Wistar→SD。動(dòng)物模型的建立采用隨機(jī)區(qū)組方法，受者SD大鼠共60只，分為5組，每組各12只。A組對照組:腎移植術(shù)前7天自大鼠尾靜脈注入生理鹽水5ml;B組imDC105組，腎移植術(shù)前7天自大鼠尾靜脈注入未經(jīng)青藤堿誘導(dǎo)的imDC懸

3、液105個(gè)；C組imDC106組，腎移植術(shù)前7天自大鼠尾靜脈注入未經(jīng)青藤堿誘導(dǎo)的imDC懸液106個(gè)；D組imDC105-SN組，移植術(shù)前7天自大鼠尾靜脈注入經(jīng)青藤堿誘導(dǎo)的imDC 懸液105個(gè)；E組imDC106-SN組，移植術(shù)前7天自大鼠尾靜脈注入經(jīng)青藤堿誘導(dǎo)的imDC懸液106個(gè)。采用顯微外科血管縫合技術(shù)建立大鼠單腎移植模型，在術(shù)后第七天從每組抽取6只受體鼠取尾靜脈血，用ELISA法進(jìn)行IL-2、IL-4、IL-10及I

4、FN-γ等的水平的測定。
　　【結(jié)果】1.常規(guī)誘導(dǎo)組與青藤堿誘導(dǎo)組有以下特征：①顯微鏡下樹突狀細(xì)胞形態(tài)無明顯的成熟樹突狀細(xì)胞的特征；②經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測樹突狀細(xì)胞表型CD80、RT1B處于低表達(dá)狀態(tài)；在多種因子的作用下可以誘導(dǎo)產(chǎn)生一定數(shù)量的大鼠骨髓來源的未成熟樹突狀細(xì)胞；可以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行；
　　2.利用顯微外科血管縫合技術(shù)建立大鼠單腎移植模型，取腎時(shí)間為28.3±5.6min，動(dòng)脈吻合時(shí)間為12.5±5.7min，靜脈吻

5、合時(shí)間為17.3±3.4min，成功率高達(dá)89.5％，可以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。
　　3.在五組受體鼠靜脈血Th1/Th2細(xì)胞因子的測定中，代表Th2的IL-4及IL-10的水平為：同濃度中，SN-imDC組高于imDC組及對照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且SN-imDC106組高于SN-imDC105組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；代表Th1的IL-2、IFN-γ等的水平為：同濃度中，SN-imDC組低于對照組及

6、imDC組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且SN-imDC106組低于SN-imDC105組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SN-imDC106組及SN-imDC105組中，代表TH2的IL-4、IL-10水平較其他組明顯增高,而代表TH1的IL-2、IFN一r的水平較其他組明顯降低。
　　【結(jié)論】1.利用顯微外科血管吻合法成功的建立起了大鼠單腎移植模型，可以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。
　　2.本實(shí)驗(yàn)證明：青藤堿誘導(dǎo)的特異