微紫青霉菌菌株GXCR基因組文庫(kù)的構(gòu)建及抗重金屬相關(guān)同源基因的克隆.pdf_第1頁(yè)
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1、微紫青霉菌（Penicillium janthinillum）菌株GXCR高抗多種重金屬鹽，在環(huán)境保護(hù)和生物浸礦等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用潛力。本研究構(gòu)建了GXCR的fosmid基因組文庫(kù)，并從中篩選抗重金屬相關(guān)同源基因，為進(jìn)一步研究該菌的抗性機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　 構(gòu)建的GXCR基因組文庫(kù)含有13，348個(gè)克隆，重組率100％，隨機(jī)插入片段約為40 kb，約覆蓋GXCR單倍體基因組14.83倍。
　　 在NCBI上尋找抗重金屬

2、相關(guān)基因的保守序列，設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增出CRS5、CUP2目的片段。用地高辛標(biāo)記CRS5、CUP2及P-type ATPase1 kbcDNA片段。通過(guò)菌落原位雜交，菌落PCR及Southern雜交驗(yàn)證，篩選到一株P(guān)-type ATPase基因的陽(yáng)性克隆，命名為P-025F7。
　　 提取P-025F7質(zhì)粒，雙酶切，Southern雜交，發(fā)現(xiàn)NotⅠ-EcoRⅠ在約10 kb處有一條信號(hào)帶；NotⅠ-HindⅢ在1 kb處有一

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