越橘花青素對人鞏膜成纖維細胞表達MMP-2、Collagen I蛋白的影響.pdf

1、目的：
　　探討越橘花青素對人胚胎鞏膜成纖維細胞(Human fetal scleral fibroblast。HFSF)表達MMP-2、Collagen I蛋白的影響。
　　方法：
　　對HFSF細胞進行復(fù)蘇培養(yǎng)，在倒置相差顯微鏡下觀察其細胞生物學(xué)特性；分別用0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1mg/mL越橘花青素作用于HFSF細胞達6h、8h、12h、24h、48h，MTT法檢測越橘花

2、青素對HFSF細胞增殖的影響；用濃度為0,10-1mg/mL的越橘花青素作用于HFSF細胞達12h，流式細胞儀檢測越橘花青素對HFSF細胞周期和細胞凋亡的影響；實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測越橘花青素對HFSF細胞表達MMP2、COL1A1、COL1A2基因的影響；免疫印跡法(Western Blot)檢測越橘花青素對HFSF細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrix metalloproteinase2。MMP-2)

3、、I型膠原蛋白(Collagen I)的影響；免疫印跡法(Western Blot)檢測TGF-β2對HFSF細胞表達I型膠原蛋白(Collagen I)的影響。
　　結(jié)果：
　　體外培養(yǎng)的成熟人胚胎鞏膜成纖維細胞多呈梭形，束狀或旋渦狀排列；MTT結(jié)果顯示越橘花青素促進HFSF細胞生長，在濃度10-1mg/mL、培養(yǎng)12h時細胞的增殖率最高；流式細胞術(shù)的結(jié)果顯示越橘花青素的作用增加了G2期的HFSF細胞，且對HFSF細胞凋亡

4、沒有影響；qRT-PCR檢測的結(jié)果顯示越橘花青素作用HFSF細胞后，下調(diào)其MMP2基因的表達量，而細胞COL1A1、COL1A2基因表達量的改變沒有統(tǒng)計學(xué)意義；Western Blot檢測的結(jié)果顯示越橘花青素作用HFSF細胞后，下調(diào)其MMP-2蛋白的表達，而細胞Collagen I蛋白的表達未檢測出；使用TGF-β2作用HFSF細胞后，Western Blot法能夠檢測到細胞Collagen I蛋白的表達。
　　結(jié)論：