雙氯芬酸對熱化療促結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的增敏作用研究.pdf

1、目的：
　　探討雙氯芬酸對熱化療促結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的增敏作用及分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.應(yīng)用MTS法測定細(xì)胞增殖抑制率，計(jì)算半數(shù)抑制率濃度（half maximal inhibitory concentration, IC50），確定順鉑和雙氯芬酸的工作濃度；
　　2.將實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、熱化療組和增敏組，再次應(yīng)用MTS法測定細(xì)胞增殖抑制率，觀察雙氯芬酸是否能夠增強(qiáng)熱化療對人結(jié)直腸癌HC T116細(xì)胞增殖

2、的抑制作用；
　　3.應(yīng)用葡萄糖測定試劑盒和乳酸測定試劑盒分別檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中殘余葡萄糖含量及乳酸生成量，RT-PCR和Western Blot檢測各組HCT116細(xì)胞膜上葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1（glucose transporter1,GLUT1）mRNA和蛋白的表達(dá)，觀察雙氯芬酸對HCT116細(xì)胞能量代謝的影響；
　　4.應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合Annexin V-FITC/PI雙染法檢測各組HCT116細(xì)胞的凋亡率，RT-PCR和

3、Western Blot檢測各組HCT116細(xì)胞凋亡相關(guān)基因mRN A和蛋白的表達(dá)，觀察Ba x/Bc l-2比值的變化。
　　5.數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mea n±SD）表示，兩樣本均數(shù)的比較以t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組間均數(shù)的比較，若滿足方差齊性則以單因素方差分析（one-way ANOVA）進(jìn)行比較，組間兩兩比較采用LSD’s法；若方差不齊，則采用we lch檢驗(yàn)，組間兩兩比較

4、采用Dunnett’s法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P﹤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.順鉑和雙氯芬酸在37℃和43℃條件下抑制HCT116細(xì)胞增殖的IC50分別為9.4μg/mL和5.2μg/mL、0.23 mM和0.12 mM。
　　2.雙氯芬酸能夠增強(qiáng)熱化療對HCT116細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　3.經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，增敏組的細(xì)胞凋亡率顯著高于熱化療組（P<0.05），結(jié)果表明雙氯芬酸可以增強(qiáng)熱

5、化療對HCT116細(xì)胞的促凋亡作用。
　　4.與熱化療組相比，增敏組HCT116細(xì)胞中促凋亡基因Bax表達(dá)顯著上調(diào)，而抗凋亡基因Bc l-2表達(dá)顯著下調(diào)，Ba x/Bc l-2比值增大。
　　5.雙氯芬酸通過下調(diào)HCT116細(xì)胞膜中GLUT1的表達(dá)，抑制其從培養(yǎng)液中攝取葡萄糖，阻礙有氧糖酵解過程，降低乳酸的生成，從而抑制了HCT116細(xì)胞的能量代謝。
　　結(jié)論：
　　雙氯芬酸能夠影響結(jié)直腸癌HCT116細(xì)胞的能量