兔移植靜脈早期重塑過(guò)程的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)仍是多支病變的首選治療。有研究表明，持續(xù)的不良重構(gòu)加速動(dòng)脈粥樣硬化，并且移植靜脈過(guò)度重塑是引起移植物再狹窄的重要因素。然而，很少有研究關(guān)注尋找移植靜脈早期重塑失控的靶基因及調(diào)控通路。
　　方法：
　　我們隨機(jī)選擇36只新西蘭大白兔建立兔自體靜脈移植再狹窄模型，將其分為6組，每組6只，于術(shù)后第1天、術(shù)后第3天、術(shù)后第7天、術(shù)后第14天、術(shù)后第28天以及術(shù)后第90天將移植靜脈取出，另取6只假手

2、術(shù)組的正常靜脈，并對(duì)其進(jìn)行血管厚度和電鏡結(jié)果分析，TUNE染色及增殖相關(guān)基因PCNA分析，繪制兔凋亡及增殖的時(shí)間變化曲線(xiàn)，選擇關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行基因表達(dá)譜研究，篩選出哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路，并觀(guān)察其在移植靜脈早期重塑過(guò)程中的變化情況。
　　結(jié)果：
　　靜脈移植術(shù)后早期（1至3天）導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)降解。術(shù)后第7天，細(xì)胞開(kāi)始增殖，膠原纖維增多，血管壁增厚。電鏡及TUNEL分析均顯示術(shù)后第1天凋亡最明顯，W

3、estern Blot及免疫組化均顯示增殖相關(guān)基因PCNA術(shù)后第7天表達(dá)最高，提示為細(xì)胞增殖高峰；因此，選擇凋亡高峰期（術(shù)后第1天）和PCNA增殖變化高峰期（術(shù)后第7天）行轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究，我們發(fā)現(xiàn)在移植后由凋亡轉(zhuǎn)增殖時(shí)哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路中兩個(gè)復(fù)合體功能有著不同的變化。在移植術(shù)后第1天和第7天，mTORC2和其下游底物蛋白激酶C表達(dá)增強(qiáng)，術(shù)后第1天表達(dá)更高。mTORC1受多種環(huán)境因素和生長(zhǎng)因子的刺激，其上游調(diào)控基因在

4、術(shù)后第1天表達(dá)增加，術(shù)后第7天表達(dá)下降，其下游基因eIF4b和4E-BP也有類(lèi)似的變化。術(shù)后第7天4E-BP表達(dá)明顯低于正常靜脈，導(dǎo)致eIF4e表達(dá)高。此時(shí)eIF4e和eIF4b表達(dá)同時(shí)增加，導(dǎo)致蛋白合成增加。
　　結(jié)論：
　　移植后由凋亡轉(zhuǎn)增殖時(shí)哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路中兩個(gè)復(fù)合體功能有著不同的變化。在移植術(shù)后第1天凋亡明顯時(shí)mTORC1及其上下游基因功能受到抑制，mTORC2功能增強(qiáng)；而術(shù)后第7天，mT