99mTc-PVLA和99mTc-GSA在評(píng)價(jià)兔肝臟缺血再灌注損傷中的應(yīng)用.pdf

1、背景：肝臟缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）是指缺血缺氧的肝臟在恢復(fù)供血供氧后功能非但沒有恢復(fù)，反而損傷程度進(jìn)一步加重的病理現(xiàn)象。肝臟由于其特殊的血供及解剖位置，很少發(fā)生缺血再灌注損傷，但肝癌手術(shù)、肝外傷破裂、肝移植及失血性休克等病理情況下肝臟均可能發(fā)生缺血再灌注損傷。如何準(zhǔn)確合理地評(píng)價(jià)缺血再灌注時(shí)肝臟的儲(chǔ)備功能，不僅對(duì)診斷肝臟疾病大有脾益，而且對(duì)評(píng)估患者療效和預(yù)測(cè)預(yù)后有很大幫助。臨床常用的

2、評(píng)價(jià)肝功能的方法，比如肝生化指標(biāo)、Child-Pugh評(píng)分、終末期肝病模型評(píng)分、吲哚菁綠(indocyanine green，ICG)排泄試驗(yàn)等，均有各自的局限性，臨床應(yīng)用有限，本實(shí)驗(yàn)旨在為評(píng)價(jià)肝臟 IRI時(shí)評(píng)價(jià)肝臟功能提供一種新思路。去唾液酸糖蛋白受體（asialoglycoprotein receptor，ASGPR）又稱肝凝集素或Ashwell-Morell受體，主要位于肝竇狀間隙側(cè)的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞表面，此外一些肝外組織也存在少量該受

3、體。當(dāng)肝臟出現(xiàn)炎癥、硬化或惡性變時(shí)，其表面的ASGPR會(huì)相應(yīng)減少。已有文獻(xiàn)證實(shí)利用其在肝功能評(píng)價(jià)及肝臟靶向治療中有很大的潛力。聚（乙烯基-O-B-D-吡喃半乳糖基-D-葡糖酰胺）（Poly(vinylbenzyl-O-b-D-galactopyranosyl-D-gluconamide)， PLVA）和乙二烯三胺五醋酸—半乳糖人血清白蛋白（acid-galactosyl-human serum albumin，GSA）均屬于ASGPR的

4、配體。已有大量文獻(xiàn)報(bào)道99mTc-GSA SPECT/CT在評(píng)估肝功能時(shí)具有重要意義,99mTc-PVLA SPECT/CT僅在評(píng)價(jià)肝癌方面有報(bào)道。尚無文獻(xiàn)報(bào)道肝臟IRI與ASGPR水平的關(guān)系以及99mTc-GSA和99mTc-PVLA在評(píng)價(jià)肝臟IRI時(shí)肝臟功能中的應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)血生化、免疫組化、99mTc-GSA和99mTc-PVLA SPECT/CT顯像來評(píng)價(jià)在不同缺血狀態(tài)下和不同再灌注時(shí)間點(diǎn)肝臟的功能狀態(tài)及ASGPR的水平

5、，來評(píng)估99mTc-PVLA和99mTc-GSA顯像在肝臟缺血再灌注中的應(yīng)用價(jià)值。
　　目的：建立新西蘭大白兔肝臟缺血再灌注損傷模型；了解兔肝臟在不同缺血狀態(tài)和不同再灌注時(shí)間點(diǎn)肝臟的功能和ASGPR水平；對(duì)比評(píng)價(jià)99mTc-PVLA和99mTc-GSA SPECT/CT在評(píng)估肝臟缺血再灌注中的意義。
　　方法：⑴實(shí)驗(yàn)分組：將32只體重沒有明顯差異雌雄不拘的新西蘭大白兔隨機(jī)分為A，B，C和D四組，A：陰性對(duì)照組；B組：缺血30

6、min組；C組：缺血45min組；D組：缺血60min組；每組再隨機(jī)分成兩組（N=4）：A1,A2;B1,B2;C1,C2;D1；D2,其中A1, B1, C1和D1組行99mTc-GSA SPECT/CT顯像；其余組均行99mTc-PVLASPECT/CT顯像。⑵實(shí)驗(yàn)方法：術(shù)前3天（T1），在超聲引導(dǎo)下經(jīng)腹行肝臟穿刺。手術(shù)采用改良Pringle法建立兔肝臟缺血再灌注模型：A組僅開腹，不夾閉肝門；B組開腹，夾閉肝門30min；C組開腹，

7、夾閉肝門45min；D組開腹，夾閉肝門60min；松開無損傷血管夾1h后（T2），取肝臟組織，關(guān)腹;3天（T3）和7天（T4）后，分別在超聲引導(dǎo)下經(jīng)腹進(jìn)行肝臟穿刺。所得組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色，ASGPR及HIF-1α免疫組化檢測(cè)。每次麻醉前，均采血測(cè)定白細(xì)胞和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平。穿刺后均進(jìn)行顯像。每次麻醉前均按照參考文獻(xiàn)和說明書標(biāo)記相應(yīng)藥物，分別用薄層色譜法（TLC）和液相

8、色譜法（PLC）測(cè)其放射性化學(xué)純度和化學(xué)純度。處理數(shù)據(jù)描繪出TAC,計(jì)算出清除指數(shù)(HH15)，受體指數(shù)（LHL15）和受體修正指數(shù)（modified receptor index,MRI）。手術(shù)前后均兔子術(shù)前術(shù)后的精神狀態(tài)，飲食飲水大小便情況。
　　結(jié)果：A組精神狀態(tài)、進(jìn)食飲水、排尿排便與術(shù)前未見明顯改變；B、C和D組均不同程度改變：精神狀態(tài)變差，運(yùn)動(dòng)減少，進(jìn)食飲水減少，排尿少，尿色黃，排便減少，糞便干、塊?。粐?yán)重程度有重到輕依

9、次為D，C，B;另外D組較其他組有明顯出血傾向。血生化指標(biāo)：白細(xì)胞各組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)及組間均未見明顯差異；ALT組內(nèi)比較： A組各時(shí)間點(diǎn)間未見明顯變化，B組：T2>T3=T4=T1, C組：T2>T3>T4=T1, D組：T2>T3>T4>T1(“=”意為二者無明顯差異，“>”意為二者存在顯著差異，且前者均值較大，下同)；組間比較：T1各組間無明顯差異，T2: D>C>B>A;T3:D>C>B=A;T4: D>C=B=A。首先對(duì)比分析99m

10、Tc-PVLA和99mTc-GSA的顯像參數(shù)，通過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)二者的顯像參數(shù)沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；因此后續(xù)分析顯像參數(shù)時(shí)就把99mTc-PVLA和99mTc-GSA的顯像參數(shù)總結(jié)在一起比較。組內(nèi)分析：A組：各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異，B組：T2>T1=T4>T3, C組：T2>T3>T1>T4, D組：T2>T3>T1>T4；組間比較:T1各組間未見顯著差異；T2:D>C>B>A;T3:D>C>A>B;T4:A=B>C>D. LHL15和MRI的

11、變化趨勢(shì)基本一致，隨著夾閉時(shí)間的延長而降低，術(shù)后逐漸恢復(fù)，肝門夾閉時(shí)間越長恢復(fù)越慢。HE染色肝細(xì)胞水腫炎細(xì)胞浸潤隨著缺血時(shí)間的延長而加重，術(shù)后1h最重，隨著術(shù)后時(shí)間延長逐漸恢復(fù)。ASGPR在正常肝臟和術(shù)后肝臟恢復(fù)正常功能初期表達(dá)最多，術(shù)后1h最低。HIF-1α正常肝臟和恢復(fù)正常功能的肝臟幾乎不表達(dá)，在術(shù)后1h表達(dá)最多，隨著術(shù)后時(shí)間延長逐漸減少。
　　結(jié)論：⑴ASGPR水平在兔肝臟缺血再灌注時(shí)降低，且與肝臟損傷程度負(fù)相關(guān)；⑵99mT