柞蠶雄蛾液防治小鼠酒精性肝纖維化機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過觀察柞蠶雄蛾液對酒精性肝纖維化動物模型的作用，以及轉(zhuǎn)化生長因子β1/Smads、結(jié)締組織生長因子、金屬蛋白酶組織抑制因子-1、骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制劑、Toll樣受體與細(xì)胞間隙連接蛋白43在肝臟中表達(dá)變化的情況，探討柞蠶雄蛾液保護(hù)肝臟的作用機(jī)制；并且通過對EMT相關(guān)指標(biāo)Twist因子、E-鈣黏蛋白與波形蛋白表達(dá)情況進(jìn)行分析，探討酒精性肝纖維化過程中 EMT的發(fā)生及柞蠶雄蛾液對酒精性肝纖維化的影響。旨在為

2、臨床拮抗酒精性肝纖維化提供較為充分的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.將雄性SPF級小鼠C57隨機(jī)進(jìn)行分組，組別為：空白對照組、模型組、柞蠶雄蛾液高劑量組和柞蠶雄蛾液低劑量組。后三組制備酒精性肝纖維化模型,每周稱重1次，連續(xù)干預(yù)16周后處死小鼠取肝臟，稱重計(jì)算肝指數(shù)。
　　2.血清學(xué)ALT與AST測定。
　　3.蘇木素-伊紅染色，觀察肝組織病理學(xué)改變。
　　4. Masson法染色，觀察膠原纖維的面積。

3、>　　5.免疫組織化學(xué)法檢測肝組織中TGF-β1、CTGF、TIMP-1、BAMBI、TLR4、Connexin43、Twist、E-Cadherin與Vimentin的蛋白表達(dá)水平。
　　6. Western blot方法檢測肝組織中 TGF-β1、SMAD2/3、BAMBI、TLR4、Twist、E-Cadherin與Vimentin的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.柞蠶雄蛾液對小鼠一般生長狀況的影響
　

4、　模型組小鼠與同期其它各組比較狀態(tài)差。柞蠶雄蛾液高劑量組小鼠與柞蠶雄蛾液低劑量組小鼠體重在一定時間內(nèi)有所增加，毛發(fā)較整齊光亮，狀態(tài)尚可。
　　2.肝指數(shù)及血清中ALT及AST檢測結(jié)果
　　模型組較之對照正常組，肝指數(shù)增大(P<0.01)；柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組較之模型組，肝指數(shù)降低(P<0.01)。與對照正常組比較，模型組的ALT與AST升高，柞蠶雄蛾液高劑量組的AST升高(P<0.01, P<0.05)。與

5、模型組比較，柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組的ALT與AST降低(P<0.01)。
　　3.肝組織HE染色及Masson染色結(jié)果
　　HE染色結(jié)果顯示，柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性，并有輕度腫脹現(xiàn)象；同時，呈現(xiàn)點(diǎn)灶狀的壞死，可見炎細(xì)胞浸潤等表現(xiàn)。柞蠶雄蛾液低劑量組壞死程度及范圍輕于柞蠶雄蛾液高劑量組，與模型組比較，其壞死程度及壞死范圍明顯減輕。模型組有纖維化改變。Masson染色結(jié)果顯示：與

6、對照正常組比較，模型組的膠原纖維面積明顯增大(P＜0.01)；膠原纖維面積在柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組中與模型組比較明顯減小(P<0.01,P<0.05)。
　　4.免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)果
　　與對照正常組比較，模型組、柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組TGF-β1、TIMP-1、CTGF、BAMBI、TLR4、Twist與Vimentin蛋白表達(dá)量明顯增高，Connexin43蛋白表達(dá)量明顯降低；模型組與

7、柞蠶雄蛾液高劑量組E-cadherin蛋白表達(dá)量明顯降低(P＜0.01)。與模型組比較，柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組TGF-β1、TIMP-1、CTGF、BAMBI、TLR4、Twist與 Vimentin蛋白表達(dá)量明顯降低，Connexin43與E-cadherin蛋白表達(dá)量明顯升高(P＜0.01, P＜0.05)。
　　5. Western blot法檢測蛋白在肝組織中的表達(dá)水平
　　與對照正常組比較：TGF-

8、β1、SMAD2/3、TLR4、Twist與Vimentin蛋白相對表達(dá)量在模型組與柞蠶雄蛾液高劑量組中增高， E-cadherin降低；柞蠶雄蛾液低劑量組TGF-β1蛋白相對表達(dá)量增高；模型組的BAMBI蛋白表達(dá)量相對水平增高(P＜0.01)。與模型組比較：柞蠶雄蛾液高劑量組與柞蠶雄蛾液低劑量組的TGF-β1、BAMBI與Twist蛋白相對表達(dá)量降低；柞蠶雄蛾液低劑量組的Smad2/3、TLR4與Vimentin蛋白相對表達(dá)量降低(P

9、＜0.01, P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.采用酒精灌胃可以誘導(dǎo)C57小鼠酒精性肝纖維化的發(fā)生。
　　2.柞蠶雄蛾液能明顯降低酒精灌胃的小鼠血清中ALT與AST水平，減輕肝細(xì)胞壞死程度及范圍，對酒精性肝損傷具有保護(hù)作用，低劑量柞蠶雄蛾液的效果優(yōu)于高劑量柞蠶雄蛾液。
　　3.酒精性肝纖維化發(fā)展過程中呈現(xiàn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在酒精誘導(dǎo)的肝纖維化過程中發(fā)揮著重要作用。
　　4.柞蠶雄蛾液對上皮-