茺蔚子及炒茺蔚子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究.pdf

1、茺蔚子為唇形科植物益母草Leonurus japonicusHoutt.的干燥成熟果實。炒茺蔚子則為其清炒制品。它們均具有活血調(diào)經(jīng)，清肝明目的功效。主治月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，目赤翳障，頭暈脹痛等癥狀。它們作為婦科常用藥，被歷版本草和藥典所收載。但現(xiàn)代人對其研究并不深入，在2010年版《中國藥典》中其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制僅有顯微、薄層鑒別項，而沒有相應(yīng)的含量控制項，炒茺蔚子則僅是被收載了但尚缺乏相應(yīng)的質(zhì)量評價指標(biāo)。這不能保證其在臨床上被安全有效地使

2、用，也都不利于該藥材的進(jìn)一步開發(fā)研究、利用。因此，本課題研究擬以其活性明確的成分鹽酸水蘇堿、亞油酸及亞麻酸等六個不飽和脂肪酸為指標(biāo)，建立茺蔚子及炒茺蔚子藥材的多個指標(biāo)成分含量測定方法；同時對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中茺蔚子薄層鑒別方法進(jìn)行修訂和優(yōu)化。此外，建立炒茺蔚子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以填補其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的空白，為炒茺蔚子的質(zhì)量評價提供實驗依據(jù)。
　　一：炒茺蔚子的炮制工藝研究。利用星點設(shè)計-效應(yīng)面法對炒茺蔚子的炮制工藝進(jìn)行優(yōu)選。使用清炒法，以炮制溫度

3、、炮制時間和炒藥機轉(zhuǎn)速為自變量，總生物堿、鹽酸水蘇堿、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量為評價指標(biāo)，對自變量各水平進(jìn)行多元回歸擬合，用效應(yīng)面法篩選最佳炮制工藝，并進(jìn)行預(yù)測分析。結(jié)果三項式擬合復(fù)合相關(guān)系數(shù)較高。最佳炮制工藝為炮制溫度為220℃，炮制時間為2 min，炒藥機轉(zhuǎn)速為14 r·min-1。最佳工藝驗證結(jié)果為：總生物堿、鹽酸水蘇堿、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量的平均值分別為9.82 mg·g-1，2.50 mg·g-1，86.16

4、mg·g-1，193.28 mg·g-1，其綜合得分與三項式擬合方程預(yù)測值偏差為0.87％。表明利用星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)選的炒茺蔚子炮制工藝，方法簡便且預(yù)測性良好，可用于炒茺蔚子的規(guī)范化生產(chǎn)。
　　二：茺蔚子及炒茺蔚子的TLC鑒別。對《中國藥典》2010年版中茺蔚子的薄層鑒別方法進(jìn)行修訂。以鹽酸水蘇堿、氯化膽堿為對照品，采用硅膠 G薄層板，以乙酸乙酯-無水乙醇-甲酸（3:2:2）為展開劑，以稀碘化鉍鉀溶液為顯色劑進(jìn)行鑒別。結(jié)果采用

5、改進(jìn)后的薄層鑒別方法對茺蔚子/炒茺蔚子中的鹽酸水蘇堿、氯化膽堿進(jìn)行鑒別，斑點清晰，分離度好。并首次增加了氯化膽堿特征鑒別，可區(qū)分茺蔚子與益母草。說明改進(jìn)后的薄層鑒別方法操作簡便、準(zhǔn)確、專屬性強。
　　三：茺蔚子及炒茺蔚子的水分、灰分及浸出物的測定。按照《中國藥典》中水分、灰分及浸出物測定法對茺蔚子及炒茺蔚子中水分、灰分及浸出物的百分含量進(jìn)行測定。本次實驗測定結(jié)果顯示，茺蔚子的測定結(jié)果與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中的基本一致，故建議2015年版《中國

6、藥典》繼續(xù)沿用原標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)。分析本次實驗結(jié)果，建議炒茺蔚子的水分含量不得過2.80%，總灰分含量不得超過9.28%，酸不溶性灰分不得超過1.74%，水溶性熱浸出物不得少于8.52%。
　　四：茺蔚子及炒茺蔚子中脂肪酸的含量測定。采用氣相色譜法（GC），以十七酸甲酯為內(nèi)標(biāo)，對茺蔚子及炒茺蔚子中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、γ-亞麻酸、α-亞麻酸這6個成分的含量進(jìn)行測定。比較茺蔚子在炮制前后各成分含量差異。測定結(jié)果顯示，茺蔚子及炒茺蔚子

7、中均含有豐富的脂肪酸類成分，無論是在茺蔚子還是炒茺蔚子樣品中這6個成分含量的高低順序均為亞油酸>油酸>γ-亞麻酸>棕櫚酸>硬脂酸>α-亞麻酸，且炒茺蔚子的含量均稍微高于茺蔚子中的含量，其中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和γ-亞麻酸在炒茺蔚子中的含量分別是茺蔚子中的1.09，1.08，1.05，1.04和1.13倍。因此，從脂肪酸成分的含量差異角度可以部分地闡明傳統(tǒng)中藥炮制理論中“逢子必炒”這一說法。
　　五：HPLC法測定茺蔚子藥材

8、中鹽酸益母草堿的含量。本次實驗研究建立了鹽酸益母草堿的HPLC含量測定方法，共測定了13批茺蔚子藥材樣品，然而只有3份樣品被檢測到含有少量的鹽酸益母草堿，且其含量很低約為十萬分之二，其他10批樣品中都不含有鹽酸益母草堿或其含量很低而無法檢測出來。因此，不能以鹽酸益母草堿的含量來作為茺蔚子的質(zhì)量評價指標(biāo)。
　　六：茺蔚子及炒茺蔚子中鹽酸水蘇堿的含量測定。采用高效液相色譜一蒸發(fā)光散射檢測器法(HPLC-ELSD)對茺蔚子及其炮制品中鹽