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1、目的:經(jīng)典瞬時(shí)受體電位I型通道(transient receptor potential channels1,TRPC1)廣泛表達(dá)于神經(jīng)中樞,但其在腦神經(jīng)的功能尚不清楚。本文旨在探索TRPC1缺失對(duì)小鼠空間記憶的影響及環(huán)境豐富(environmental enrichment,EE)的干預(yù)作用。
方法:本研究選用3-5月齡的TRPC1敲除小鼠(TRPC1-/-)和野生型小鼠(wide-type,WT)。實(shí)驗(yàn)分為4組:未處理WT
2、小鼠、環(huán)境豐富處理WT小鼠、未處理TRPC1-/-小鼠和環(huán)境豐富處理TRPC1-/-小鼠。環(huán)境豐富處理小鼠時(shí)間為6周。采用條件恐懼實(shí)驗(yàn)、Y迷宮實(shí)驗(yàn)和電跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TRPC1缺失及環(huán)境豐富處理對(duì)小鼠的記憶的影響。通過(guò)熒光差異雙向凝膠電泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)結(jié)合質(zhì)譜分析的方法研究TRPC1缺失誘導(dǎo)小鼠記憶損傷的潛在分子機(jī)制及
3、環(huán)境豐富的干預(yù)作用機(jī)制。免疫熒光組織化學(xué)、尼氏染色和 TUNEL染色檢測(cè)各組小鼠神經(jīng)細(xì)胞丟失/凋亡變化。使用Western blot分析對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)篩選出的差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。
結(jié)果:條件恐懼實(shí)驗(yàn)、Y迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致顯示,TRPC1缺失可誘導(dǎo)小鼠空間記憶損傷,環(huán)境豐富可顯著改善TRPC1-/-小鼠記憶損傷。2D-DIGE結(jié)合質(zhì)譜分析的結(jié)果表明,與野生對(duì)照組相比,TRPC1-/-小鼠海馬組織中共發(fā)現(xiàn)10個(gè)差異性表達(dá)蛋白。
4、環(huán)境豐富處理的TRPC1-/-小鼠與未處理的TRPC1-/-小鼠相比,其海馬組織中共有22個(gè)差異性表達(dá)的蛋白。其中,相比WT小鼠,電壓依賴性陰離子選擇通道蛋白2(Voltage-dependent anion-selective channel protein2,VDAC2)在TRPC1-/-小鼠中表達(dá)顯著上調(diào)。相比TRPC1-/-小鼠,與記憶損傷相關(guān)的蛋白α-互聯(lián)蛋白(α-internexin)和神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子β(Glia matu
5、ration factor beta,GMF-β)在環(huán)境豐富處理的TRPC1-/-小鼠中顯著降低。免疫熒光化學(xué)、尼氏染色和TUNEL均表明 TRPC1缺失導(dǎo)致神經(jīng)元丟失/凋亡。Western blot分析發(fā)現(xiàn),α-internexin與GMF-β的表達(dá)水平改變,與2D-DIGE的結(jié)果一致。
結(jié)論:綜上結(jié)果表明,TRPC1缺失可誘導(dǎo)小鼠記憶損傷,并改變其海馬組織中多種蛋白的表達(dá),其機(jī)制可能是TRPC1缺失導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞丟失相關(guān)。環(huán)
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