活版印刷基因芯片制備系統(tǒng)及相關(guān)技術(shù)研究.pdf

1、生物芯片技術(shù)是繼基因工程（重組 DNA技術(shù)）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）之后在分子生物學(xué)領(lǐng)域中的又一重大突破。在生物芯片技術(shù)中，發(fā)展最為成熟，研究最為廣泛的是基因芯片技術(shù)?；蛐酒饕袃煞N制備方法：點樣法和原位合成法，點樣法存在著生產(chǎn)成本高、繁瑣的實驗步驟、較低的集成密度等缺點。原位合成法生產(chǎn)速度較快、實驗步驟簡單、點陣呈指數(shù)遞增以及高靈敏度等優(yōu)點，但是也存在合成序列長度受限，或者合成試劑受到專利保護等問題。從今后大規(guī)模、批量化生產(chǎn)及應(yīng)

2、用前景的角度考慮，利用高度自動化技術(shù)平臺、批量化原位合成基因芯片是重要的發(fā)展方向。因此，發(fā)展完善和開發(fā)快捷、成本低廉的DNA陣列原位合成技術(shù)具有重要意義。
　　本論文在已提出的活版印刷原位合成制備基因芯片新方法的基礎(chǔ)上，開展如下幾個方面的工作：
　　（1）對于活版印刷原位合成基因芯片自動化系統(tǒng)進行了初步探討。主要研究和探討了儀器各系統(tǒng)設(shè)計思路，并對前后兩種材質(zhì)模板的精度作了較為詳細(xì)的統(tǒng)計分析。當(dāng)將系統(tǒng)的底盤和模板由聚四氟乙烯

3、改換成不銹鋼后，由于不銹鋼自身較低的延展性使得底盤和模板不易發(fā)生形變，提高了儀器的精度。
　　（2）對宮頸癌患者和正常婦女進行了基因組的提取和靶序列擴增；實驗對常規(guī)的酚/氯仿法加以改進，提取血液的DNA；設(shè)計了 p53第四外顯子的引物，PCR擴增，為后續(xù)應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。得到的DNA條帶清晰明亮、整齊，質(zhì)量很好，可直接用于PCR擴增反應(yīng)。
　　（3）應(yīng)用檸檬酸鈉還原法、檸檬酸鈉-鞣酸還原法、抗壞血酸還原法、硼氫化鈉還原法制備