TRX1-TXNIP在衰老A549細胞氧化-抗氧化失衡中的作用研究.pdf

1、目的：觀察衰老狀態(tài)下，CSE對A549細胞TXNIP及TRX1表達的影響，并探討TRX1/TXNIP是否參與了衰老A549細胞氧化/抗氧化失衡及其意義。
　　方法：采用不同濃度的BrdU（0μM、10μM、20μM、40μM）處理A549細胞10天，用SA-β-gal染色、流式細胞術(shù)檢測細胞衰老的情況；采用合適濃度BrdU復(fù)制A549細胞衰老模型，Western blot及免疫熒光進一步驗證A549細胞衰老情況；10％CSE處理對

2、照組和模型組12h，并分別設(shè)立相應(yīng)對照組，免疫熒光檢測各組細胞內(nèi)ROS含量，CCK-8檢測細胞增殖活力，Western blot檢測各組中TXNIP、TRX1的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.SA-β-gal染色的結(jié)果顯示，與0μM組（5.65±0.56）相比，10μM、20μM、40μM各組SA-β半乳糖苷酶染色陽性率均明顯增加，分別為66.81±2.05，75.54±3.41，82.25±2.92，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

3、<0.05）；流式細胞術(shù)檢測細胞周期結(jié)果顯示，與0μM組（58.72±2.52）相比，10μM、20μM、40μM各組G0/G1期的細胞比率均明顯增加，分別為74.11±3.89，78.18±4.57，76.29±2.76，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，對0μM組（38.38±2.16）而言，10μM、20μM、40μM各組S期細胞比率均降低了，分別為20.50±4.75，16.08±3.40，18.29±3.35差異具有統(tǒng)計學(xué)意

4、義（P<0.05），各組 G2/M期細胞比率分別為2.90±0.39，5.39±0.86，5.74±2.12，5.41±2.30，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示 BrdU能調(diào)節(jié)細胞周期，使細胞周期阻滯于G0/G1期；Western blot及免疫熒光的結(jié)果示，與0μM組（0.22±0.015）相比，10μM BrdU處理組細胞周期抑制因子P21(衰老標(biāo)志物)的表達顯著增加了，為0.61±0.021（P<0.05），綜上所述，1

5、0μM BrdU成功復(fù)制了A549細胞衰老模型。
　　2.DCF檢測細胞內(nèi)ROS含量示，模型組（11.46±0.37）高于對照組（5.73 ±0.28），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CSE處理組（13.68±0.44，7.16±0.19）均高于未處理組（11.46±0.37，5.73±0.28），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.CCK-8檢測細胞增殖活力示，模型組（0.64±0.06）低于對照

6、組（0.97±0.04），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CSE處理組（0.37±0.01，0.85±0.03）均低于未處理組（0.64±0.06，0.97±0.04），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.Western blot檢測TXNIP蛋白表達顯示，模型組（0.33±0.03）高于對照組（0.24±0.04），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），CSE處理組（0.57±0.08，0.43±0.05）均高于未處

7、理組（0.33±0.03，0.24±0.04），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Western blot檢測TRX1蛋白表達顯示，模型組（0.56±0.05）低于對照組（0.75±0.03），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），CSE處理組（0.28±0.02，0.40±0.02）均低于未處理組（0.56±0.05，0.75±0.03），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.直線相關(guān)分析顯示 TXNIP與 TRX1表達