2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、瘦素(leptin)是肥胖基因(ob)的編碼產(chǎn)物,為16 kDa的親水性多肽,在哺乳動(dòng)物中主要由脂肪組織合成,而在魚類中主要在肝臟產(chǎn)生。成熟的leptin進(jìn)入血液,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織中發(fā)揮作用,參與機(jī)體的多種生物學(xué)功能,包括攝食調(diào)節(jié)、能量平衡、生長、生殖、免疫和骨代謝等。研究表明,leptin必須通過與leptin受體(leptin receptor,LepR)結(jié)合,才能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
  LepR是一種跨膜受體,屬于Ⅰ類細(xì)

2、胞因子受體家族,廣泛分布于動(dòng)物機(jī)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周組織中,通過mRNA的可變剪接和/或蛋白酶水解作用產(chǎn)生了多種LepR亞型,魚類中最早由Wong等人在海洋青鯔(Oryzias melastigma)中克隆了長型LepR的cDNA序列。截至目前,在魚類中被發(fā)現(xiàn)的LepR大多只有一種,只在大西洋鮭魚、鯽魚、虹鱒魚和羅非魚中克隆出了受體的不同亞型。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)從鯽魚中克隆了三種LepR亞型的eDNA序列,分別是長型受體cclpr-L、幾乎

3、不含胞內(nèi)區(qū)的“無尾”短型受體cclpr-S1、不含跨膜區(qū)的短型受體cclpr-S2(推測編碼可溶性受體)。目前關(guān)于魚類可溶性LepR的研究還很少。
  本研究從蛋白水平進(jìn)一步對(duì)鯽魚cclpr-S2進(jìn)行檢測與分析,比較cclpr-S2與leptin-a和leptin-b的結(jié)合能力差異;并構(gòu)建cclpr-S1、cclpr-L的真核熒光蛋白載體,為以后研究cclpr-S1的內(nèi)化以及cclpr-L與cclpr-S1的異二聚體化等問題打下基

4、礎(chǔ)。
  1.通過RT-PCR和RACE技術(shù),擴(kuò)增獲得leptin-b的完整的編碼區(qū)和3'UTR,系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明鯽魚leptin-b與建鯉同源性最高,兩者再與草魚匯成一支,最終與斑馬魚匯成一支。
  2.為了在蛋白水平上檢測并分析血清中cclpr-S2與leptin-a、leptin-b的結(jié)合差異,以進(jìn)一步了解leptin-a、leptin-b的不同功能。我們首先構(gòu)建重組表達(dá)載體pET32-leptin-b,在25℃、0

5、.1 mM IPTG條件下誘導(dǎo)表達(dá)pET32-leptin-a和pET32-leptin-b,并用鎳柱進(jìn)行純化;提取鯽魚血清進(jìn)行pull-down實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)與Trx-leptin-b相比,鯽魚血清中的cclpr-S2更容易被Trx-leptin-a所吸附,說明leptin-a與cclpr-S2的結(jié)合能力比leptin-b強(qiáng),推測leptin-a可能是LepR的主要配體。
  3.構(gòu)建真核熒光蛋白載體 pcDNA3.1-cclpr-

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