抗EGFR治療提高復(fù)發(fā)食管癌放療療效的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn).pdf

1、背景：
　　在我國(guó)，食管癌是高發(fā)惡性腫瘤，發(fā)病率列第三位，死亡率列第四位。食管癌患者確診時(shí)，大多已不能通過手術(shù)達(dá)到根治治療，放化療綜合治療成為食管癌無法手術(shù)患者的重要治療辦法。但即使已行放化療，食管癌局部復(fù)發(fā)的概率為30-40％。復(fù)發(fā)后食管癌的治療成為再程治療的難題，再治療效果差，治療風(fēng)險(xiǎn)大。研究認(rèn)為是食管癌復(fù)發(fā)治療效果不佳的原因可能為：(1)食管組織在已經(jīng)接受較高照射劑量后，再行局部復(fù)發(fā)區(qū)域的放療，正常組織耐受性差，放療劑量無法

2、提高；(2)復(fù)發(fā)食管癌腫瘤內(nèi)區(qū)域乏氧程度較前增高，對(duì)再次放療抵抗程度增加。研究證明，乏氧區(qū)域的腫瘤EGFR基因也出現(xiàn)高表達(dá)，所以利用EGFR靶向治療與放療的結(jié)合，有可能成為治療復(fù)發(fā)性食管癌的有效治療方法。尼妥珠單抗可用來治療EGFR表達(dá)陽(yáng)性腫瘤的分子靶向藥物，目前臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)可與放療結(jié)合治療食管癌，是目前國(guó)際唯一獲批治療食管癌的單抗藥物。
　　目的：
　　通過建立動(dòng)物食管癌復(fù)發(fā)模型，采用尼妥珠單抗加放療對(duì)復(fù)發(fā)食管癌模型進(jìn)行治

3、療，觀察抑制腫瘤生長(zhǎng)的情況，確定探討抗EGFR治療聯(lián)合放療對(duì)于復(fù)發(fā)食管癌的療效；應(yīng)用細(xì)胞流式技術(shù)，免疫組化技術(shù)，Western Blot等技術(shù)，探討不同食管癌復(fù)發(fā)模型乏氧狀態(tài)和EGFR表達(dá)的關(guān)系，分析EGFR抑制劑抗腫瘤的作用機(jī)制。
　　方法：
　　Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)常氧和乏氧培養(yǎng)下加或不加尼妥珠單抗EC109食管鱗癌細(xì)胞中EGFR、p-EGFR和HIF-1α的蛋白表達(dá)水平。細(xì)胞流式技術(shù)檢測(cè)EC109細(xì)胞不同處

4、理方式后的細(xì)胞周期和凋亡狀態(tài)。構(gòu)建兩種食管癌復(fù)發(fā)腫瘤模型：(1)裸鼠種植腫瘤前24小時(shí)行X線照射種植部位10Gy；(2)常規(guī)建立裸鼠皮下移植瘤后，照射20Gy待腫瘤再生長(zhǎng)，并以常規(guī)裸鼠移植瘤模型進(jìn)行對(duì)照。各組裸鼠成瘤并達(dá)到入組標(biāo)準(zhǔn)后，每種模型均分為空白對(duì)照組、單純放療組、尼妥珠單抗組以及尼妥珠單抗聯(lián)合放療組4種組，觀察測(cè)量腫瘤生長(zhǎng)曲線。同時(shí)采用免疫組化染色分析不同腫瘤模型HIF-1α和EGFR表達(dá)情況。采用配對(duì)T檢驗(yàn)，單因素方差分析進(jìn)行

5、統(tǒng)計(jì)分析。P<0.05為認(rèn)為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　Western Blot分析顯示乏氧狀態(tài)下EC109細(xì)胞的HIF-1α、EGFR高表達(dá)，應(yīng)用尼妥珠單抗可下調(diào)p-EGFR的表達(dá)。流式細(xì)胞分析顯示尼妥珠單抗聯(lián)合放療組將細(xì)胞主要阻滯在細(xì)胞周期G2、細(xì)胞凋亡比率最高。腫瘤組織免疫組化染色證實(shí)復(fù)發(fā)模型腫瘤HIF-1α表達(dá)增加，細(xì)胞膜上EGFR的表達(dá)亦明顯增高。腫瘤生長(zhǎng)延遲實(shí)驗(yàn)證實(shí)，放射治療均可抑制腫瘤生長(zhǎng)，單純尼妥珠

6、單抗治療與空白對(duì)照組沒有明顯差異；復(fù)發(fā)食管癌腫瘤生長(zhǎng)速度與常規(guī)模型相比生長(zhǎng)較慢，尼妥珠單抗聯(lián)合放療治療組腫瘤生長(zhǎng)明顯延遲，P＜0.05。
　　結(jié)論：
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，食管癌細(xì)胞乏氧程度增加， EGFR表達(dá)程度亦增加，而尼妥珠單抗可下調(diào)p-EGFR表達(dá)。對(duì)于EGFR高表達(dá)的復(fù)發(fā)性食管腫瘤，尼妥珠單抗可以提高放射治療敏感性，明顯改善復(fù)發(fā)性食管癌的放療療效。本實(shí)驗(yàn)為臨床上復(fù)發(fā)食管癌治療提供新思路，為尼妥珠單抗用于提高復(fù)發(fā)性食管癌