基于金磁微粒的D-二聚體快速定量檢測方法學(xué)的建立.pdf

1、目的:
　　D-二聚體（D-dimer，D-D）是臨床用以排除血栓類急癥等疾病的重要生物學(xué)指標(biāo)，目前常用的檢測方法主要以免疫學(xué)原理為基礎(chǔ)，這些方法均在不同程度上存在缺陷（如不能準(zhǔn)確定量、操作步驟復(fù)雜、需配合大型儀器等）。本課題以新型磁性復(fù)合微粒材料(金磁微粒)為載體，運(yùn)用雙抗體夾心法的免疫學(xué)檢測原理，建立一種可直接利用全血進(jìn)行快速定量檢測D-二聚體的方法，并進(jìn)行性能評價。
　　方法:
　　1、將抗體偶聯(lián)在金磁微粒表面形

2、成復(fù)合物，同時將制備好的抗體磁粒復(fù)合物噴涂在結(jié)合墊上。最后按照試紙條的組裝方法制備D-二聚體檢測試紙條備用。
　　2、對上述制備好的試紙條進(jìn)行優(yōu)化：分別通過對濾血膜種類的篩選、樣本稀釋液種類與pH篩選以及稀釋比例的確定等，建立D-二聚體全血檢測裝置。
　　3、針對上述建立的D-二聚體全血檢測裝置分別從精密度（批內(nèi)、批間精密度）、準(zhǔn)確度（回收率、方法學(xué)比對）、靈敏度、線性和干擾物質(zhì)方面進(jìn)行分析性能評價。
　　結(jié)果:

3、>　　1、用于D-二聚體檢測的全血樣本為經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝的健康人全血，并選用生理鹽水以1:1稀釋比例緩沖，上樣量100μl，反應(yīng)時間為30min,檢測范圍為0.1～4μg/ml，在上述線性范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2大于0.97，符合相關(guān)臨床使用的需求。
　　2、各項性能評價指標(biāo)結(jié)果為：（1）精密度：三批次檢測的批內(nèi)精密度分別為6.15％、5.85%、5.43%，批間精密度為5.84%；（2）回收率：三批次檢測回收率分別為103.6%

4、、102.9%、98.9%；（3）方法學(xué)比對：回歸方程為y=1.05x-0.01，R2=0.958（R=0.979）＞0.95，系統(tǒng)誤差為3%；（4）線性范圍：線性回歸圖中I批相對系數(shù)R2為0.996，斜率（b）0.997、截距（a）-0.003，Ⅱ批R2為0.995，b為1.025、a為-0.02，Ⅲ批R2為0.991，b為1.008、a為0.001；（5）靈敏度：三批次檢測的最低檢出限分別為0.009μg/ml、0.013μg/ml

5、、0.010μg/ml；（6）干擾實(shí)驗：兩種不同濃度的D-dimer標(biāo)準(zhǔn)品的高血脂樣本偏差分別為5.33%、5.17%，膽紅素偏差為3.33%、6%，同種濃度D-dimer標(biāo)準(zhǔn)品的不同溶血度偏差分別為3.33%、4%、4.06%。
　　結(jié)論:
　　基于金磁微粒的D-二聚體快速定量檢測方法與其他檢測方法相比，具有操作簡單、快速定量、特異性高等優(yōu)點(diǎn)，無需大型儀器設(shè)備即可得到檢測結(jié)果，同時檢測結(jié)果與臨床已廣泛使用的檢測方法具有很好