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1、目的:
D-二聚體(D-dimer,D-D)是臨床用以排除血栓類(lèi)急癥等疾病的重要生物學(xué)指標(biāo),目前常用的檢測(cè)方法主要以免疫學(xué)原理為基礎(chǔ),這些方法均在不同程度上存在缺陷(如不能準(zhǔn)確定量、操作步驟復(fù)雜、需配合大型儀器等)。本課題以新型磁性復(fù)合微粒材料(金磁微粒)為載體,運(yùn)用雙抗體夾心法的免疫學(xué)檢測(cè)原理,建立一種可直接利用全血進(jìn)行快速定量檢測(cè)D-二聚體的方法,并進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。
方法:
1、將抗體偶聯(lián)在金磁微粒表面形
2、成復(fù)合物,同時(shí)將制備好的抗體磁粒復(fù)合物噴涂在結(jié)合墊上。最后按照試紙條的組裝方法制備D-二聚體檢測(cè)試紙條備用。
2、對(duì)上述制備好的試紙條進(jìn)行優(yōu)化:分別通過(guò)對(duì)濾血膜種類(lèi)的篩選、樣本稀釋液種類(lèi)與pH篩選以及稀釋比例的確定等,建立D-二聚體全血檢測(cè)裝置。
3、針對(duì)上述建立的D-二聚體全血檢測(cè)裝置分別從精密度(批內(nèi)、批間精密度)、準(zhǔn)確度(回收率、方法學(xué)比對(duì))、靈敏度、線(xiàn)性和干擾物質(zhì)方面進(jìn)行分析性能評(píng)價(jià)。
結(jié)果:
3、> 1、用于D-二聚體檢測(cè)的全血樣本為經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝的健康人全血,并選用生理鹽水以1:1稀釋比例緩沖,上樣量100μl,反應(yīng)時(shí)間為30min,檢測(cè)范圍為0.1~4μg/ml,在上述線(xiàn)性范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)R2大于0.97,符合相關(guān)臨床使用的需求。
2、各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果為:(1)精密度:三批次檢測(cè)的批內(nèi)精密度分別為6.15%、5.85%、5.43%,批間精密度為5.84%;(2)回收率:三批次檢測(cè)回收率分別為103.6%
4、、102.9%、98.9%;(3)方法學(xué)比對(duì):回歸方程為y=1.05x-0.01,R2=0.958(R=0.979)>0.95,系統(tǒng)誤差為3%;(4)線(xiàn)性范圍:線(xiàn)性回歸圖中I批相對(duì)系數(shù)R2為0.996,斜率(b)0.997、截距(a)-0.003,Ⅱ批R2為0.995,b為1.025、a為-0.02,Ⅲ批R2為0.991,b為1.008、a為0.001;(5)靈敏度:三批次檢測(cè)的最低檢出限分別為0.009μg/ml、0.013μg/ml
5、、0.010μg/ml;(6)干擾實(shí)驗(yàn):兩種不同濃度的D-dimer標(biāo)準(zhǔn)品的高血脂樣本偏差分別為5.33%、5.17%,膽紅素偏差為3.33%、6%,同種濃度D-dimer標(biāo)準(zhǔn)品的不同溶血度偏差分別為3.33%、4%、4.06%。
結(jié)論:
基于金磁微粒的D-二聚體快速定量檢測(cè)方法與其他檢測(cè)方法相比,具有操作簡(jiǎn)單、快速定量、特異性高等優(yōu)點(diǎn),無(wú)需大型儀器設(shè)備即可得到檢測(cè)結(jié)果,同時(shí)檢測(cè)結(jié)果與臨床已廣泛使用的檢測(cè)方法具有很好
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