水產品中多種重金屬污染物的聯合毒性及化學拮抗機制研究.pdf

1、目的：近年來，重金屬污染的健康危害已經成為我國亟待研究解決的衛(wèi)生問題。目前重金屬毒性的研究主要是針對單一重金屬毒性，而對實際攝入的多種重金屬的聯合毒性研究較少。通過體外實驗探討多種抗氧化劑/絡合劑對水產品中常見重金屬污染物鉛、鎘、汞、銅、鋅、錳、鉻、鎳之間的聯合毒性作用及化學拮抗機制，為防治環(huán)境中多種重金屬的聯合毒性提供科學依據。
　　方法：基于前期實驗結果，確定八種常見重金屬混合污染物和三種抗氧化劑/絡合劑的濃度，重金屬混合物劑

2、量分為LC25，LC50，LC75組，三種抗氧化劑/絡合劑分為五個濃度梯度，分別為處理組 M8+1、M8+2、M8+3、M8+4、M8+5，通過體外細胞學實驗，采用MTT實驗比較三種不同的抗氧化劑/絡合劑對八種常見重金屬混合污染物細胞毒性的拮抗或抑制作用，并觀察細胞的形態(tài)學變化；熒光素酶實驗檢測正常小鼠上皮 J B細胞中轉錄因子 NF-κB的表達情況；采用蛋白免疫印跡法檢測正常人肝HL7702細胞中各種信號蛋白的表達情況。
　　結

3、果：在一定的重金屬混合物染毒劑量下（LC25，LC50，LC75），給予不同濃度的抗氧化劑/絡合劑進行干預。染毒24h后，隨著不同的抗氧化劑/絡合劑濃度的升高，在一定劑量范圍內，細胞生存活力得到明顯恢復，特別在高劑量重金屬混合物濃度（LC75）時，細胞的生存率明顯上升。經普通光學倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)發(fā)現通過給予不同劑量的抗氧化劑/絡合劑進行干預后，細胞形態(tài)逐漸恢復正常。經熒光素酶檢測試驗測定發(fā)現，重金屬混合污染物可以使 JB6細胞內轉

4、錄因子 NF-κB的表達水平上調，而三種抗氧化劑/絡合劑能夠下調 NF-κB的表達水平。八種常見重金屬混合污染物可以引起HL7702細胞凋亡、致癌和氧化應激系統(tǒng)的有關的基因信號如COX-2、Akt、p-Akt、NF-κB、Fas、Bax、Nrf2、HO-1和 NQO1等蛋白的表達上調，絡合劑乙二胺四乙酸二鈉鈣（EDTA2NaCa）、抗氧化劑還原性谷胱甘肽（GSH）、抗氧化劑茶多酚這三種抗氧化劑/絡合劑則可以使相應的基因的信號蛋白表達水平

5、下調。
　　結論：八種常見重金屬混合污染物可以引起細胞凋亡、致癌和氧化應激系統(tǒng)的有關基因的信號蛋白表達上調，絡合劑 EDTA2NaCa、抗氧化劑 GSH、抗氧化劑茶多酚這三種抗氧化劑/絡合劑則可以使相應的基因信號的蛋白表達水平下調，還能夠明顯的緩解八種重金屬混合污染物的細胞毒性，提高細胞的生存率，使細胞內轉錄因子 NF-κB的表達水平下調。本實驗結果提示，這三種抗氧化劑/絡合劑在一定的劑量條件下，能緩解多種重金屬引起的細胞氧化應激