TGFβ1-Smad3信號在高鹽致血管平滑肌細胞增殖及膠原生成中的作用.pdf

1、目的：確定高鹽是否通過 TGFβ1/Smad3信號通路誘導血管平滑肌細胞（VSMCs）增殖及膠原的合成和分泌。
　　方法：（1）TGFβ1 I型受體阻斷劑（SB431542）干預濃度的確定采用組織塊貼壁法培養(yǎng)原代VSMCs，傳至第四代后去血清同步化，在DMEM培養(yǎng)基中加入不同濃度的SB431542（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L）及高鹽（Na+159mmol/L）干預72h后,

2、利用MTT比色法檢測不同濃度的SB431542對高鹽干預的VSMCs的增殖率，以確定SB431542的最佳干預濃度。（2）效應與機制分析實驗分組為：正常(NS)組，正常+TGFβ1 I型受體阻斷劑（N+SB431542）組，高鹽(HS)組，高鹽+ TGFβ1 I型受體阻斷劑（H+SB431542）組，細胞增殖檢測試劑盒(Cell proliferation Kit，CCK-8)檢測VSMCs增殖情況；免疫熒光檢測COLI、P-Smad3

3、蛋白的表達情況及定位；Western blotting檢測COL I、COLIII、AngII、p-Smad3蛋白的表達情況。real-time PCR檢測Col I、Col III mRNA表達情況。ELISA法測SB431542干預后細胞上清液TGFβ1、COL I、COLIII濃度。
　　結果：MTT法結果顯示SB431542濃度在5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L均能明顯抑制高鹽引起的VS

4、MCs增殖。CCK-8實驗結果顯示HS組較NS組能明顯促進 VSMCs增殖（P<0.05）,H+SB431542組較 HS組 VSMCs增殖率明顯降低（P<0.05），N+SB431542組較NS組無明顯差異。Western blotting結果顯示HS組較NS組COL I、COLIII、AngII和p-Smad3蛋白表達明顯增高（P<0.05）。H+SB431542組較HS組COL I、COLIII、AngII、p-Smad3蛋白表達

5、明顯降低(P<0.05)，N+SB431542組較NS組COL I、COLIII、P-Smad3蛋白表達明顯降低(P<0.05)，AngII蛋白表達明顯增高；免疫熒光結果顯示，Col I定位細胞漿、P-Smad3定位細胞核，HS組較NS組Col I和P-Smad3表達明顯增高，H+SB431542組較HS組Col I和P-Smad3蛋白表達明顯降低，N+SB431542組較NS組Col I和P-Smad3蛋白表達明顯降低；real-ti

6、me PCR檢測結果顯示 HS較 NS組 Col I、Col III mRNA表達明顯增高(P<0.05)，H+SB431542較HS組Col I、Col III mRNA表達降低(p<0.05)，N+SB431542較NS組Col I、Col III mRNA表達降低(P<0.05)。ELISA結果顯示HS組較NS組細胞上清液TGFβ1、Col I、Col III濃度明顯增高(P<0.05)，H+SB431542組較HS組細胞上清液T