榼藤子酸的提取分離及抗糖尿病活性研究.pdf

1、榼藤子為豆科榼藤子屬植物榼藤子 Entada phaseoloides(Linn.) Merr.的干燥種仁，系傣族地區(qū)的習(xí)用藥材。主要用于治療痔瘡、胃痛、便秘、水腫等病癥。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，榼藤子屬植物具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛等多種生物活性。對其化學(xué)成分的研究表明，三萜皂苷類成分是榼藤子的主要活性成分。本課題組前期研究表明榼藤子皂苷具有一定的降血糖活性,能顯著降低T2DM大鼠空腹血糖水平和胰島素水平。榼藤子酸作為榼藤子皂苷的

2、主要苷元形式，且為榼藤子的特征性成分，其是否具有降糖活性尚未見報道。本文通過對榼藤子中榼藤子酸進行提取分離，并通過體內(nèi)、外實驗對其抗糖尿病活性進行系統(tǒng)研究，并初步探討其作用機制。
　　本研究以榼藤子種仁為材料，采用70％乙醇浸泡提取，醇提物用石油醚萃取去脂后過HP-20大孔樹脂柱色譜，以水-乙醇體系進行梯度洗脫，收集50%乙醇部位進一步純化得到榼藤子總皂苷。采用2N HCl90℃反應(yīng)2h對總皂苷進行酸水解，水解產(chǎn)物經(jīng)乙酸乙酯萃取后

3、過 MCI柱色譜進一步分離純化，用水-乙醇體系梯度洗脫，得到榼藤子酸。采用高效液相色譜法（HPLC）進行純度分析得榼藤子酸純度≥98%。
　　采用大鼠骨骼肌細胞L6及胰島素抵抗HepG2細胞為體外細胞模型探討榼藤子酸對葡萄糖消耗的影響。結(jié)果顯示，榼藤子酸能顯著提高 L6細胞基礎(chǔ)狀態(tài)及HepG2細胞胰島素抵抗狀態(tài)時的葡萄糖消耗量，且呈一定的劑量依賴性。結(jié)果提示榼藤子酸可能具有潛在的降糖活性。接著，我們以 L6細胞為研究對象，選取了幾

4、種榼藤子酸同類或結(jié)構(gòu)相似的五環(huán)三萜類化合物體進行外葡萄糖消耗的對比研究。結(jié)果顯示，榼藤子酸、熊果酸、齊墩果酸均在一定程度上促進了 L6成肌細胞葡萄糖消耗，顯示了良好的體外降糖活性，且榼藤子酸的效果優(yōu)于熊果酸和齊墩果酸。
　　我們以 L6細胞為靶細胞進行下一步的機制研究。結(jié)果顯示，榼藤子酸可促進IRAP轉(zhuǎn)膜，間接提示其可能對GLUT4的轉(zhuǎn)位有促進作用。Western blotting結(jié)果進一步證實，榼藤子酸可顯著增加 GLUT4的蛋

5、白表達水平，并且能顯著增加AMPK和ACC的磷酸化水平。結(jié)果表明榼藤子酸可能是通過AMPK信號通路介導(dǎo)的GLUT4的轉(zhuǎn)位和表達而增加葡萄糖消耗的。
　　為驗證榼藤子酸的體內(nèi)抗糖尿病活性，我們選取自發(fā)性二型糖尿病模型db/db小鼠為動物模型用榼藤子酸（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）或二甲雙胍（150mg/kg）進行藥物干預(yù)。連續(xù)灌胃6周后，榼藤子酸顯著逆轉(zhuǎn)了db/db小鼠血糖持續(xù)升高的趨勢，并改善了db/db小鼠葡萄

6、糖耐量和胰島素耐量，降低了其血清TC、TG、LDL-C、TNF-α水平，升高了HDL-C水平。病理組織切片結(jié)果顯示，榼藤子酸在一定程度上改善了 db/db小鼠肝臟氣球樣變和脂肪變性，并且對胰島形態(tài)的異常也具有顯著的改善作用。對小鼠肝臟 MDA、SOD水平檢測結(jié)果表明，榼藤子酸顯著降低了db/db小鼠肝臟MDA含量，升高了SOD活力水平。Western blotting結(jié)果進一步證實，榼藤子酸對db/db小鼠肌肉組織GLUT4蛋白表達具有