脂肪干細胞誘導(dǎo)分化為淋巴管內(nèi)皮細胞信號通路的探究.pdf

1、目的：
　　探討 VEGFR3和 Integrinα9信號通路在血管內(nèi)皮細胞生長因子 C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C156s)誘導(dǎo)脂肪間充質(zhì)干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）向淋巴管內(nèi)皮細胞（lymphatic endothelial cells，LECs）早期分化過程中的作用及其對誘導(dǎo)后細胞遷移功能的影響。
　　方法：

2、>　　本實驗共分為3個部分
　?。?）取人脂肪間充質(zhì)干細胞（human adipose-derived stem cells， HADSCs）隨機分為3組：VEGF-C誘導(dǎo)組（含100ng/ml VEGF-C)、VEGF-C加VEGFR3磷酸化酶抑制劑組（含100ng/ml VEGF-C+5umol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制劑MAZ51）、空白對照組（常規(guī)DMEM/F12培養(yǎng)基），誘導(dǎo)培養(yǎng)10天后， Western blot檢

3、測各組磷酸化VEGFR3(p-VEGFR3)的表達水平（預(yù)實驗）。
　?。?）另取HADSCs隨機分為5組：空白對照組（常規(guī)DMEM/F12）、VEGF-C誘導(dǎo)組（含100 ng/ml VEGF-C)、VEGF-C聯(lián)合抑制劑a組（含100 ng/ml VEGF-C+5 umol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制劑MAZ51）、VEGF-C聯(lián)合抑制劑 b組（含100 ng/ml VEGF-C+10 ug/ml的Anti-Integrin

4、α9功能封閉性抗體Y9A2）、VEGF-C聯(lián)合抑制劑a+b組，連續(xù)培養(yǎng)10 d后，Western blot和細胞免疫熒光（IF）檢測LECs標志性分子VEGFR3、Integrinα9、LYVE-1的相對表達量。
　?。?）把100ng/ml VEGF-C誘導(dǎo)10天后的細胞分別用30ug/ml的Anti-Integrinα9封閉性抗體、5umol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制劑、聯(lián)合兩種抑制劑作用30min，并設(shè)置對照組，Tran

5、swell小室檢測各組細胞遷移數(shù)量的變化。
　　結(jié)果：
　?。?）5umol/L的 VEGFR3磷酸化酶抑制劑 MAZ51可以明顯減弱p-VEGFR3的表達水平（P=0.000）。
　?。?）與誘導(dǎo)組相比，分別阻斷VEGFR3和Integrinα9通路都會相應(yīng)減弱LYVE-1的表達（PWestern=0.000，PIF=0.000），且在上述溶度下兩抑制劑對LYVE-1的減弱作用差異無統(tǒng)計學(xué)意義（PWestern=0.

6、164﹥0.05，PIF=0.927﹥0.05）；而分別阻斷任一通路對另一通路的表達量都沒有影響（PWesternVEGFR3(BVSD)=O.804,PIFVEGFR3(BVSD)=O.528,PWesternI ntegrinα9(BVSC)=0.914，PIFIntegrinα9(BVSC)=O.593）。
　　（3）與抑制劑作用之前相比，分別阻斷Integrinα9和VEGFR3會使遷移細胞數(shù)量相應(yīng)減少（P=0.000），