胎膜早破及妊娠期糖尿病的新策略研究.pdf

1、第一部分基于UPLC/Q-TOF-MS技術(shù)的胎膜早破血清代謝組學研究
　　背景：
　　胎膜早破是指在臨產(chǎn)前胎膜自然破裂。胎膜早破是圍生期最常見的并發(fā)癥之一，可導致早產(chǎn)，胎盤早剝，臍帶脫垂等造成圍生兒病死率增加，宮內(nèi)感染率及產(chǎn)褥感染率升高。導致胎膜早破的原因有很多，也有可能是多因素相互作用而導致的結(jié)果。目前，胎膜早破的發(fā)病機制還不明了。代謝組學（metabolomics）是繼基因組學，蛋白質(zhì)組學后發(fā)展起來的新興組學，通過分析內(nèi)

2、源性代謝物的變化從而反映機體的狀態(tài)。將代謝組學的研究應用于母胎醫(yī)學，有望實現(xiàn)對疾病的預測、診斷及發(fā)病機制的闡釋，對母體和胎兒預后有重要意義。
　　目的：
　　本實驗利用高靈敏、高準確性、高分離度，快速、自動化的UPLC/Q-TOF-MS代謝組學的研究平臺，對PROM孕婦和健康對照孕婦的血清標本進行代謝組學分析，分析胎膜早破與健康對照孕婦在代謝物水平上是否存在差異，從中找到可能的疾病標志物。同時從代謝水平層面探索PROM的發(fā)病

3、機制。
　　方法：
　　本實驗采用UPLC/Q-TOF-MS的研究平臺，探討PROM孕婦(n=22)和健康對照組（n=31）之間的血清代謝組的變化。通過MarkerView v1.2.1軟件對實驗原始數(shù)據(jù)進行提取和歸一化處理，運用SIMCA-P13.0軟件進行主成分分析（PCA），采用PCA模型區(qū)別樣本總體性的差異，從整體上初步了解組間的分組情況。利用正交偏最小二乘法判別分析（OPLS-DA）建立統(tǒng)計模型，進一步分析樣本間的

4、差異。根據(jù)OPLS-DA模型變量重要投影（VIP），篩選出VIP大于1的變量，同時結(jié)合SPSS非參數(shù)檢驗篩選出差異代謝物。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)PCA和OPLS-DA分析后PROM與健康對照孕婦能夠明顯區(qū)分開，最終找到了18中差異代謝物。PROM孕婦與健康對照孕婦相比主要在以下種類中發(fā)生變化：甘油磷脂類如PE（磷脂酰乙醇胺），PC（磷脂酰膽堿）；脂肪酰類如L-Carnitine（左旋肉堿），Resolvin D5（消退素5），

5、L-Acetylcarnitine（乙酰肉堿）；脂肪酸類如Calendic acid（十八碳三烯酸），Lucidenic acid C（赤芝酸C）；氨基酸類如5-Aminopentanoic acid（氨基戊酸）， N-(3-Methylbutyl)acetamide（ N-3甲基乙酰），5-Hydroxyindoleacetaldehyde（5-羥乙醛）。
　　結(jié)論：
　　這些差異代謝物可能通過脂肪酸氧化、脂肪酸代謝、氨基

6、酸代謝和甘油磷脂代謝紊亂，導致胎膜早破的發(fā)生。通過對胎膜早破的代謝組學分析有利于疾病的早期診斷與干預管理，是未來臨床發(fā)展的新領(lǐng)域。
　　第二部分基于酶和分子信標介導的鏈置換放大反應檢測妊娠期糖尿病相關(guān)microRNA的研究
　　背景：
　　妊娠期糖尿病是指在妊娠前沒有任何程度的血糖異常，在妊娠期才患有的糖尿病，是妊娠最常見的并發(fā)癥之一。血清miRNA（microRNA）異常表達與相關(guān)疾病的早期診斷、預后判斷密切相關(guān)。越

7、來越多的證據(jù)表明，miRNA是涉及糖尿病的發(fā)病機制。血清miRNA222可作為非侵入性生物標志物預測GDM的發(fā)展。
　　目的：
　　對于miRNA分析的傳統(tǒng)方法有Northern雜交，微陣列分析和實時定量PCR（qRT-PCR）。但是這些方法需要消耗大量的樣品、對儀器要求高且昂貴、比較耗時費力等。發(fā)展靈敏、快速、簡便的miRNA檢測新方法具有重大意義。本研究通過酶和分子信標介導的鏈置換放大反應建立了一個高度敏感和高特異性的電

8、化學生物傳感器用于檢測miRNA。
　　方法：
　　本研究基于酶和分子信標介導的鏈置換放大反應檢測妊娠期糖尿病相關(guān)miRNA。當靶miRNA存在時，miRNA與相應部分的特異性雜交使莖環(huán)被打開，觸發(fā)鏈置換（SDA）擴增反應。擴增產(chǎn)物的一部分可以與固定在電極上的捕獲探針進行雜交，另一部分與生物素化的檢測探針雜交,通過生物素親和素系統(tǒng)的橋接作用可以連接到堿性磷酸酶并產(chǎn)生酶的電化學信號用于miRNA的定量檢測。
　　結(jié)果：<