CTP-FoxM1抗原負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠FoxM1陽(yáng)性肝癌皮下模型的免疫治療效應(yīng).pdf

1、目的:體外培養(yǎng)Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞株，了解FoxM1作為腫瘤抗原在該細(xì)胞株中蛋白的表達(dá)水平，探討Hepa1-6細(xì)胞用于小鼠FoxM1陽(yáng)性肝癌皮下模型建立的可能性；摸索Hepa1-6細(xì)胞建立C57BL/6小鼠FoxM1陽(yáng)性皮下肝癌的最佳條件；并探討CTP-FoxM1負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠FoxM1陽(yáng)性皮下肝癌的免疫治療作用。
　　方法:在37℃、5％CO2孵箱中，采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基（1%青鏈霉素）培養(yǎng)小鼠

2、肝癌細(xì)胞株Hepa1-6，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hepa1-6肝癌細(xì)胞，RIPA裂解液（強(qiáng)）提取Hepa1-6細(xì)胞總蛋白，western blot方法鑒定FoxM1在小鼠肝癌細(xì)胞系Hepa1-6中的表達(dá)水平。于C57BL/6小鼠右脅腹皮下注射濃度分別5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的 Hepa1-6細(xì)胞0.1ml，觀察小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)情況并每?jī)商鞙y(cè)量瘤體體積，繪制皮下肝癌的生長(zhǎng)曲線，摸索小鼠皮下成瘤的最適條件； HE染色鑒定

3、皮下腫瘤組織，同時(shí)Western blot檢測(cè)腫瘤組織中FoxM1的表達(dá)情況。以濃度為1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1轉(zhuǎn)導(dǎo)DC48h制成疫苗，注射于荷瘤小鼠左脅腹皮下，測(cè)量并記錄小鼠皮下肝癌瘤體的變化情況，病理檢查確定腫瘤在肺、肝、脾等臟器的轉(zhuǎn)移情況，ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平，最終評(píng)估CTP-FoxM1負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠皮下肝癌的免疫治療效應(yīng)。此外，我們還采用ELISA方法檢測(cè)了

4、78例PHC患者血清中CXCL13的表達(dá)情況，回顧性分析患者臨床病理特征和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)并探討CXCL13在肝癌中臨床意義。
　　結(jié)果:Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞中高表達(dá)FoxM1，可以用來(lái)建立FoxM1陽(yáng)性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml濃度的Hepa1-6細(xì)胞0.1ml荷瘤C57BL/6小鼠，建模時(shí)間短、成功率較高，HE染色多見病理性核分裂，腫瘤內(nèi)微血管豐富，與臨床HCC類似，為觀察后續(xù)DC疫苗在小鼠體內(nèi)的的抗腫瘤免疫效應(yīng)

5、奠定了基礎(chǔ)。CTP-FoxM1抗原負(fù)載的DC疫苗治療Hepa1-6肝癌細(xì)胞荷瘤小鼠，小鼠腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，且與CTP、FoxM1、PBS負(fù)載的DC疫苗對(duì)照組相比，皮下瘤體積和腫瘤重量均更小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CTP-FoxM1組小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2的表達(dá)量與其他組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.5)，HE病理檢查正常低表達(dá)FoxM1的小腸未發(fā)現(xiàn)炎癥以及組織損傷。原發(fā)性肝癌患者血清CXCL13表達(dá)水平明顯高于健康人，并且與腫瘤大

6、小、轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)。
　　結(jié)論:Hepa1-6細(xì)胞為FoxM1陽(yáng)性的小鼠肝癌細(xì)胞株，可用于FoxM1陽(yáng)性小鼠皮下肝癌的建立。0.1ml濃度為3x107/ml的Hepa1-6細(xì)胞可以在C57BL/6小鼠體內(nèi)建立穩(wěn)定的皮下移植瘤，為肝癌的治療提供理想的動(dòng)物模型。CTP-FoxM1抗原負(fù)載的DC疫苗對(duì)小鼠皮下移植瘤顯示出免疫治療效應(yīng)，且明顯高于單獨(dú)的FoxM1負(fù)載的DC疫苗組，說(shuō)明有CTP負(fù)載系統(tǒng)的DC疫苗能更好激活抗腫瘤免疫