糖尿病大鼠視網(wǎng)膜過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助激活因子1α表達和表觀遺傳修飾的研究.pdf

1、目的：糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常見的并發(fā)癥。先期血糖控制對DR的發(fā)生及進展具有長期影響，這種現(xiàn)象稱之為“代謝記憶”。本研究通過檢測糖尿病大鼠視網(wǎng)膜過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator1α，PGC-1α)mRNA、蛋白表達及PPARGC1A啟動子區(qū)DNA甲基化的改變，探討

2、糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中PGC-1α的變化趨勢、表觀遺傳學(xué)修飾改變及其在糖尿病視網(wǎng)膜病變代謝記憶中的作用。
　　方法：應(yīng)用腹腔注射鏈脲霉素(streptozotocin，STZ)方法建立糖尿病大鼠模型。糖尿病組大鼠被隨機分為3亞組：控制不佳組(poor glycemic control group，PC)4個月中血糖控制不佳;控制不佳-控制組(poor glycemic control-good glycemic control gr

3、oup，PC-Rev)持續(xù)2個月血糖控制不佳，后2個月維持正常血糖水平;控制組(good glycemic control group，GC)4個月中均保持血糖正常。對照組(control group，CON)為周齡匹配的正常飼養(yǎng)大鼠。分離各實驗組大鼠視網(wǎng)膜組織，應(yīng)用實時PCR法(real-time PCR，RT-PCR)檢測PGC-1α及超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase2，SOD2)mRNA表達，應(yīng)用West

4、ern blot法檢測PGC-1α及錳超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase，MnSOD)蛋白表達，應(yīng)用亞硫酸氫鈉測序法(bisulfite sequencing PCR，BSP)檢測PPARGC1A啟動子區(qū)DNA甲基化狀態(tài)的變化。
　　結(jié)果：糖尿病控制組，控制不佳-控制組，控制不佳組大鼠視網(wǎng)膜組織中PGC-1αmRNA表達依次下降。與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000，P=0.0

5、00，P=0.000);控制不佳-控制組與控制不佳組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.078);控制組與控制不佳組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002）。糖尿病控制組，控制不佳-控制組，控制不佳組大鼠視網(wǎng)膜組織中SOD2mRNA表達依次增加。與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.006，P=0.000，P=0.000）;控制不佳-控制組與控制不佳組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.165）;控制組與控制不佳組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義

6、(P=0.001)。糖尿病大鼠視網(wǎng)膜PGC-1α及MnSOD蛋白表達下降，其中控制不佳-控制組，控制不佳組降低程度相同。糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜組織中PPARGC1A啟動子區(qū)DNA甲基化增加，控制不佳-控制組與控制不佳組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.342)。
　　結(jié)論：糖尿病大鼠視網(wǎng)膜PGC-1αmRNA及蛋白表達下降，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜SOD2mRNA表達增加，MnSOD蛋白表達下降，改變具有代謝記憶的特點。PPARGC1A啟動子區(qū)DNA甲