利多卡因通過cAMP-PKA信號通路負性調(diào)控NLRP3炎性體表達.pdf

1、目的：觀察利多卡因對脂多糖誘導的急性炎癥反應中 NLRP3炎性體表達的影響，探討其是否通過活化 cAMP/PKA信號通路負性調(diào)控脂多糖誘導的THP-1巨噬細胞NLRP3炎性體的表達。
　　方法：以THP-1細胞為研究對象，用佛波酯誘導為貼壁巨噬細胞，用LPS刺激構建炎癥模型。將THP-1巨噬細胞隨機分為五組：a、空白對照組：常規(guī)培養(yǎng)的THP-1巨噬細胞；b、 Lidocaine組：20ug/ml利多卡因處理THP-1巨噬細胞24h

2、；c、LPS組：10ng/ml LPS刺激THP-1巨噬細胞6h；d、LPS+lidocaine組：20ug/ml利多卡因預處理THP-1巨噬細胞24h，再予以10ng/ml LPS刺激THP-1巨噬細胞6h；e、阻斷劑組(LPS+lidocaine+M組)：利多卡因（20ug/ml）預處理THP-1細胞24h，再加入10ng/ml LPS刺激6h，最后加入10μmol/l MDL-12,330A(M)共同刺激30min。采用酶聯(lián)免疫吸

3、附試驗法（ELISA）測定細胞上清液中IL-1β、IL-18的表達，蛋白質印跡法（western blot）檢測NLRP3炎性體相關蛋白NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表達。
　　結果：ELISA和Western Blot結果顯示：1）與LPS組相比， LPS+lidocaine組ELISA檢測上清液細胞因子IL-1β、IL-18表達明顯下降，細胞內(nèi)NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白表達顯著降低；與Contro

4、l組相比，Lidocaine組細胞上清液IL-1β、IL-18及細胞內(nèi)NLRP3、ASC和 Caspase-1蛋白表達無明顯差異；說明利多卡因對非炎癥狀態(tài)的THP-1巨噬細胞無明顯作用，但可負性調(diào)控LPS誘導THP-1巨噬細胞 NLRP3炎性體的表達，抑制 IL-1β、IL-18的分泌。2）與LPS+lidocaine組相比，LPS+lidocaine+M組細胞上清液中IL-1β、IL-18表達明顯增多，細胞內(nèi)NLRP3、ASC和Cas