羥基紅花黃色素A對小鼠支氣管哮喘模型氣道炎癥的免疫調(diào)節(jié)機制.pdf

1、目的：探討羥基紅花黃色素A對小鼠支氣管哮喘模型的治療作用及作用機制。
　　方法：取正常雌性BALB/c小鼠40只，體重在18～22g，隨機分為5組，每組8只，分別為空白對照組、支氣管哮喘模型組、羥基紅花黃色素A低劑量治療組、羥基紅花黃色素A高劑量治療組、地塞米松陽性對照組。除空白對照組外，其余各組于第1天及第14天分2次腹腔注射致敏混合液200μl（含卵蛋白100μg，氫氧化鋁干粉4mg）,第21天開始給予3％卵蛋白（OVA）5m

2、l霧化吸入，30min/次，連續(xù)3天激發(fā)。空白對照組給予等量的生理鹽水激發(fā)。觀察小鼠是否出現(xiàn)呼吸急促、兩便失禁、焦躁不安、腹肌抽搐等支氣管哮喘發(fā)作癥狀。于第17天開始，治療組給予連續(xù)7天羥基紅花黃色素A灌胃，低劑量治療組（30mg/kg），高劑量治療組（60mg/kg）。地塞米松組陽性對照組按（0.5mg/kg）灌服地塞米松7天。對照組和模型組給予等劑量的生理鹽水灌胃。在最后1次激發(fā)結(jié)束24小時后處死小鼠。將各組小鼠均以乙醚麻醉后，按照

3、實驗設(shè)計取支氣管肺泡灌洗液（BALF）和肺組織等標本。行Diff-Quick染色觀察BALF中炎癥細胞分類和計數(shù)。通過PAS染色法和HE染色法觀察小鼠肺組織的病理學(xué)改變。通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13等炎癥因子的變化。通過免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠肺組織內(nèi)NF-κBp65蛋白的表達情況及免疫印跡法(Western blotting)檢測各組小鼠肺組織內(nèi)NF-κBp65、p

4、38MAPK信號通路的表達情況。
　　結(jié)果：
　　（1）支氣管哮喘模型組小鼠與對照組相比BALF中炎癥細胞計數(shù)、IL-4、IL-5、IL-13等水平明顯升高，差異顯著(P<0.05)。羥基紅花黃色素A低劑量和高劑量治療組小鼠BALF中嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞等炎癥細胞計數(shù)及IL-4、IL-5、IL-13等炎性因子較支氣管哮喘模型組明顯減少，差異顯著(P<0.05)。
　?。?）通過顯微鏡觀察小鼠肺組織PAS、

5、HE染色可見：支氣管哮喘模型組小鼠氣道上皮下嗜酸粒細胞、淋巴細胞、中性粒細胞、肥大細胞等的浸潤，以及氣道粘膜下組織水腫、支氣管平滑肌痙攣、杯狀細胞增生及氣道分泌物增多等病理學(xué)改變；而羥基紅花黃色素A低劑量和高劑量組治療組小鼠肺組織上述病理學(xué)改變較支氣管哮喘模型組明顯減輕；對照組小鼠肺組織無明顯病理學(xué)改變。
　　（3）通過免疫組化檢測示：NF-κBp65蛋白表達在支氣管哮喘模型組顯著高于對照組；而在羥基紅花黃色素A治療的兩組蛋白表達

6、水平較支氣管哮喘模型組顯著降低。
　　（4）免疫印跡法檢測結(jié)果顯示：NF-κBp65、p38MAPK信號通路的表達在支氣管哮喘模型組顯著高于對照組（P＜0.05）；而在羥基紅花黃色素A治療的兩組表達明顯低于支氣管哮喘模型組（P＜0.05）。羥基紅花黃色素A高劑量組較低劑量表達減低更顯著(P＜0.05)。
　　結(jié)論:羥基紅花黃色素A可能通過抑制支氣管哮喘小鼠肺組織內(nèi)NF-κBp65蛋白及p38MAPK信號通路的表達，從而抑制輔