紫金牛、鐵掃帚基于DCN對COPD大鼠TGF-β1-Smad3通路調(diào)控及其對肺脹（痰熱壅肺型）臨床療效觀察.pdf

1、目的:
　　動物實(shí)驗(yàn):研究DCN、TGFβ1/Smad3信號傳導(dǎo)通路對COPD大鼠氣道重塑的干預(yù)作用并試圖探討其可能的作用機(jī)制，通過不同劑量苗藥紫金牛、鐵掃帚對COPD大鼠進(jìn)行干預(yù)，采用免疫組化和realtimeRT-PCR檢測大鼠肺組織中DCN、TGFβ1、Smda3蛋白和基因表達(dá)情況，以探討紫金牛、鐵掃帚在抑制氣道重塑中的作用機(jī)制。
　　臨床觀察:應(yīng)用苗藥紫金牛、鐵掃帚治療慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰熱壅肺型患者，通過觀

2、察患者中醫(yī)證候、血?dú)夥治?、肺功能?分鐘行走試驗(yàn)等指標(biāo)變化，以了解患者的臨床療效，并探討其作用機(jī)理。
　　方法:
　　動物實(shí)驗(yàn):將60只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組12只，COPD模型組48只。模型組予以香煙煙熏及脂多糖氣道注射建立大鼠COPD模型，隨機(jī)選取模型組8只與正常對照組大鼠2只行蘇木素-伊紅(HE)染色對比鑒定造模是否成功。將造模成功的剩余40只大鼠隨機(jī)分為4組:COPD模型組，苗藥紫金牛、鐵掃帚高劑量組（以

3、下簡稱為高劑量組），苗藥紫金牛、鐵掃帚中劑量組（以下簡稱為中劑量組），苗藥紫金牛、鐵掃帚低劑量組（以下簡稱為低劑量組），每組各10只。苗藥組按苗藥紫金牛、鐵掃帚高、中、低劑量組分別予以灌胃，2次/日，連續(xù)灌胃30天。灌胃結(jié)束后取各組大鼠肺組織進(jìn)行HE染色，觀察肺組織病理學(xué)改變;通過免疫組織化學(xué)(SP)染色法檢測各組肺組織中DCN、TGFβ1、Smad3蛋白的表達(dá);用realtimeRT-PCR檢測大鼠肺組織中DCNmRNA、TGFβ1m

4、RNA、Smad3mRNA的表達(dá)變化;以探討DCN與TGF-β1/Smad3和肺組織氣道重塑的相關(guān)性及苗藥紫金牛、鐵掃帚對COPD大鼠氣道重塑的干預(yù)機(jī)制是否與DCN調(diào)控TGF-β1/Smad3信號通路相關(guān)。
　　臨床觀察:將符合納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)的60例慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)、肺脹痰熱壅肺型患者采用隨機(jī)、開放、對照試驗(yàn)，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)值表法，按就診先后順序?qū)⒒颊唠S機(jī)分為西醫(yī)常規(guī)治療加苗藥紫金牛、鐵掃帚治療組（以下簡

5、稱苗藥組）、西醫(yī)常規(guī)治療組（以下簡稱對照組）。治療方法:對照組采用常規(guī)抗炎、止咳、平喘等對該藥物無影響的西醫(yī)常規(guī)綜合治療，苗藥組在此基礎(chǔ)上加用苗藥紫金牛、鐵掃帚煎劑口服，2次/日，療程14天，觀察兩組患者治療前后的中醫(yī)證候積分、血?dú)夥治鯬aO2、PaCO2、肺功能中FEV1/FVC、FEV1/預(yù)計值、6分鐘行走試驗(yàn)的變化，綜合評估其治療效果。
　　結(jié)果:
　　動物實(shí)驗(yàn):
　　1.HE染色結(jié)果提示，與正常對照組比較，模型

6、組大鼠肺組織病理學(xué)改變符合臨床觀察的COPD病理學(xué)特點(diǎn)，苗藥紫金牛、鐵掃帚高、中、低劑量組大鼠肺組織病理學(xué)改變均較模型組輕，其中高、中劑量組大鼠肺組織病理學(xué)改變減輕明顯，尤以高劑量組最顯著。
　　2.免疫組化結(jié)果提示，正常肺組織中TGF-β1、Smad3蛋白略有表達(dá)，DCN蛋白弱表達(dá)。COPD模型組與正常對照組比較，TGF-β1、Smad3表達(dá)明顯增多，差異有顯著意義;DCN表達(dá)明顯減少，差異有顯著意義。苗藥紫金牛、鐵掃帚干預(yù)后，

7、苗藥高、中劑量TGF-β1、Smad3蛋白的表達(dá)較模型組明顯減少，差異有顯著意義;苗藥低劑量組TGF-β1、Smad3蛋白的表達(dá)較模型組減少，差異無顯著意義;苗藥高、中、低劑量組DCN蛋白的表達(dá)較模型組增強(qiáng)，差異有顯著意義，其中以苗藥高劑量組DCN蛋白表達(dá)增強(qiáng)最明顯。
　　3.realtimeRT-PCR檢測提示，正常肺組織中TGFβ1mRNA、Smad3mRNA、DCNmRNA略有表達(dá)。COPD模型組與正常對照組比較TGFβ1m

8、RNA、Smad3mRNA表達(dá)增強(qiáng)，差異有顯著意義，DCNmRNA表達(dá)減弱，差異有顯著意義。苗藥紫金牛、鐵掃帚干預(yù)后，苗藥高、中劑量組大鼠肺組織中TGFβ1mRNA、Smad3mRNA表達(dá)較模型組明顯減低，差異有顯著意義，苗藥低劑量組大鼠肺組織中TGFβ1mRNA、Smad3mRNA表達(dá)較模型組減低，差異無顯著意義;苗藥高、中、低劑量組DCNmRNA的表達(dá)較模型組增強(qiáng)，差異有顯著意義，其中以苗藥高劑量組DCNmRNA增強(qiáng)最明顯。

9、　　臨床觀察:
　　1.苗藥組與對照組治療前中醫(yī)各項(xiàng)癥狀及體征相比較結(jié)果無顯著差異。治療后苗藥組對慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期痰熱壅肺型患者中醫(yī)證候均有明顯改善，差異有顯著意義;對照組對咳嗽、咳痰、痰色及噦音方面有改善，差異有顯著意義，其余指標(biāo)均無明顯變化，差異無顯著意義;苗藥組在臨床控制、顯效、有效的例數(shù)及總有效率明顯高于對照組，差異有顯著意義。
　　2.苗藥組與對照組治療前患者肺功能指標(biāo)FEV1/FVC、FEV1/預(yù)計值結(jié)

10、果無顯著差異。治療后苗藥組與對照組組內(nèi)比較患者肺功能指標(biāo)FEV1/FVC、FEV1/預(yù)計值均有改善，差異有顯著意義;苗藥組與對照組組間比較患者肺功能指標(biāo)FEV1/FVC、FEV1/預(yù)計值均有改善，差異有顯著意義。
　　3.苗藥組與對照組治療前患者血?dú)夥治鲋笜?biāo)PO2、PCO2值結(jié)果無顯著差異。治療后苗藥組與對照組組內(nèi)比較患者血?dú)夥治鲋笜?biāo)PO2、PCO2值均有改善，差異有顯著意義;苗藥組與對照組組間比較患者血?dú)夥治鲋笜?biāo)PO2、PCO2

11、值均有改善，差異有顯著意義。
　　4.苗藥組與對照組治療前患者6分鐘行走試驗(yàn)測量值結(jié)果無顯著差異。治療后苗藥組與對照組組內(nèi)比較患者6分鐘行走試驗(yàn)有改善，差異有顯著意義;苗藥組與對照組組間比較患者6分鐘行走試驗(yàn)結(jié)果無顯著差異。
　　結(jié)論:
　　動物實(shí)驗(yàn):
　　1.與正常對照組比較，模型組出現(xiàn)氣道重塑。經(jīng)苗藥紫金牛、鐵掃帚治療后，氣道管壁及平滑肌增厚程度較前減輕，管腔狹窄程度較前恢復(fù)，以高劑量組最明顯，提示有效劑量的

12、苗藥紫金牛、鐵掃帚具有抑制氣道重塑作用。
　　2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，TGF-β1及Smad3蛋白及基因在肺組織的高表達(dá)參與COPD氣道重塑的形成并發(fā)揮重要作用。DCN在COPD模型組中表達(dá)減少，經(jīng)苗藥紫金牛、鐵掃帚干預(yù)后，DCN表達(dá)增加，TGF-β1、Smad3表達(dá)減少，且經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析DCN與TGF-β1及Smad3呈負(fù)相關(guān)，考慮DCN在改善COPD氣道重塑方面起到重要作用。推測苗藥紫金牛、鐵掃帚抑制氣道重塑的機(jī)制作用靶點(diǎn)可能是通過直

13、接下調(diào)Smad3、TGF-β1的表達(dá)，或是通過提高DCN的表達(dá)從而抑制TGF-β1/Smad3信號傳導(dǎo)通路而實(shí)現(xiàn)。
　　臨床觀察:
　　1.在動物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，使用有效劑量苗藥紫金牛、鐵掃帚聯(lián)合西醫(yī)常規(guī)治療能有效改善慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰熱壅肺證患者的臨床癥狀，提高患者活動耐量，改善肺功能及血?dú)獾券熜?。其效果?yōu)于西醫(yī)常規(guī)治療。
　　2.推測該藥物的療效機(jī)制可能與其抑制氣道重塑，修復(fù)受損肺組織，改善患者肺功能有關(guān)，也