SARI和PC4在宮頸癌細(xì)胞生長中的作用與機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　宮頸癌作為高發(fā)的惡性腫瘤嚴(yán)重危害著女性的生殖健康，目前宮頸癌的發(fā)病率在全球女性惡性腫瘤中位居第四，在發(fā)展中國家宮頸癌的死亡率居女性惡性腫瘤死亡率的首位。根據(jù)2015年NCCN發(fā)布的宮頸癌臨床指南中顯示宮頸癌的治療仍然以患者的手術(shù)切除為主，以放療、化療為輔助治療手段，對于不同病程的患者采取的主要治療策略也有所不同，所以在臨床治療中宮頸癌的早期診斷、治療策略的效果評估和預(yù)后的追蹤檢測顯得尤為重要。與其他腫瘤相比，宮頸癌存在

2、一段較長時間的癌前病變過程，且在此期間無明顯的臨床癥狀，現(xiàn)階段病理診斷及腫瘤分子標(biāo)志物的應(yīng)用對患者進(jìn)行預(yù)后評估的準(zhǔn)確性相對較差，因此明確宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)基礎(chǔ)對探索有效的腫瘤標(biāo)記物有重要價值。
　　SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)又稱BATF2(basic leucinezippertranscription factor，ATF-like2)。正常

3、表達(dá)于人體多種組織中，在腫瘤發(fā)生過程中可以作為抑癌基因發(fā)揮抑制腫瘤生長的功能。SARI在乳腺、前列腺上皮細(xì)胞等正常組織中表達(dá)明顯高于其腫瘤組織，其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有明顯的相關(guān)性，也有研究發(fā)現(xiàn)SARI低表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲過程。以上研究均表明在細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化、增殖的過程中SARI表達(dá)水平下調(diào)，提示SARI可能抑制腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展。
　　PC4(positive coactivator4)是存在于細(xì)胞核內(nèi)的一種

4、輔助轉(zhuǎn)錄因子，可以參與細(xì)胞內(nèi)DNA轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等多種表達(dá)調(diào)控過程。有研究發(fā)現(xiàn)PC4在多種腫瘤組織中（如食管癌、乳腺癌及肺癌等）表達(dá)顯著升高，并發(fā)現(xiàn)PC4的高表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移、放療抵抗等密切相關(guān)。以上研究均表明在細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化、增殖過程中PC4表達(dá)水平上調(diào)，提示PC4可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　無論是抑癌基因SARI或是促癌基因PC4，在多種正常組織與腫瘤組織中的表達(dá)量均存在顯著差異，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

5、然而在宮頸癌中SARI或PC4的生物學(xué)功能及相關(guān)分子機(jī)制尚未見報道。故本研究以宮頸癌細(xì)胞為研究對象，以探究SARI和PC4對宮頸癌細(xì)胞生長的影響為主要目的，并通過闡明其表達(dá)調(diào)控的部分機(jī)制，為進(jìn)一步探究宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分 SARI在宮頸癌細(xì)胞生長中的作用和機(jī)制研究
　　首先通過Real-time PCR檢測SARI在宮頸癌臨床樣本中的表達(dá)特點;然后在He

6、La和CaSki細(xì)胞轉(zhuǎn)染SARI的表達(dá)質(zhì)粒上調(diào)SARI的表達(dá)水平;使用Real-time PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染SARI的表達(dá)質(zhì)粒后SARI表達(dá)水平的變化;CCK-8法檢測宮頸癌細(xì)胞SARI表達(dá)上調(diào)后對細(xì)胞生長的影響;流式細(xì)胞術(shù)分析上調(diào)SARI后細(xì)胞的周期和凋亡;報告基因檢測轉(zhuǎn)錄因子AP-1的轉(zhuǎn)錄活性;Western blot檢測抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2的表達(dá)。
　　第二部分 PC4在宮頸癌細(xì)胞生長中的作

7、用和機(jī)制研究
　　首先通過Real-time PCR檢測PC4在宮頸癌臨床樣本和宮頸癌細(xì)胞系中的表達(dá)特點;然后采用RNA干擾技術(shù)下調(diào)HeLa和CaSki細(xì)胞中PC4表達(dá);使用Real-time PCR和Western blot檢測上述宮頸癌細(xì)胞中沉默PC4后PC4表達(dá)水平的變化;CCK-8法檢測宮頸癌細(xì)胞PC4表達(dá)水平的改變對細(xì)胞生長的影響;流式細(xì)胞技術(shù)分析沉默PC4后的細(xì)胞周期;Western blot檢測在沉默PC4后宮頸癌細(xì)

8、胞中PARP及抗凋亡相關(guān)分子的表達(dá)水平的變化;通過Real-time PCR、Western blot等實驗探索相關(guān)分子信號通路對PC4表達(dá)的調(diào)控。
　　結(jié)果:
　　1.SARI在宮頸癌組織中低表達(dá)。SARI表達(dá)水平上調(diào)后，細(xì)胞生長活性受到抑制，凋亡細(xì)胞增加但對細(xì)胞周期沒有明顯影響。上調(diào)SARI的表達(dá)對AP-1的轉(zhuǎn)錄活性產(chǎn)生抑制，下調(diào)了抗凋亡分子Mcl-1的表達(dá)水平，但對Bcl-2的表達(dá)水平?jīng)]有產(chǎn)生顯著的影響。
　　2

9、.PC4在宮頸癌組織中高表達(dá)。PC4表達(dá)水平下調(diào)后，宮頸癌細(xì)胞的生長受到抑制，細(xì)胞周期發(fā)生阻滯且細(xì)胞發(fā)生凋亡，檢測相關(guān)分子發(fā)現(xiàn)PARP發(fā)生剪切，抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2表達(dá)均下調(diào)。PC4在宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)水平與E6癌蛋白的表達(dá)相關(guān);E6原癌蛋白可以下調(diào)p53的表達(dá)并上調(diào)PC4的表達(dá);抑癌因子p53可以抑制PC4的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.上調(diào)SARI使宮頸癌細(xì)胞的生長活性受到抑制，細(xì)胞發(fā)生凋亡。且在宮頸癌中SAR