stathmin-1與相關(guān)蛋白對宮頸上皮內(nèi)瘤變復(fù)發(fā)的影響及在宮頸癌細(xì)胞中作用機(jī)制的研究.pdf

1、宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，在發(fā)展中國家其新發(fā)病例及死亡率較高，嚴(yán)重威脅女性的健康和生命。高級別子宮頸上皮內(nèi)瘤變是宮頸癌的癌前病變，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和正確有效治療可以預(yù)防疾病進(jìn)展為宮頸癌，其治療的預(yù)后直接影響宮頸癌的發(fā)生。因此，闡明影響宮頸上皮內(nèi)瘤變預(yù)后的因素及找到預(yù)防宮頸癌有效的治療方法非常重要。
　　既往有較多研究證明stathmin-1在多種惡性腫瘤中的表達(dá)呈高水平，且與惡性腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后相關(guān)。但有關(guān)stathmin-

2、1在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與相關(guān)分子蛋白的相互關(guān)系及對疾病的復(fù)發(fā)及預(yù)后的影響研究很少。
　　本課題通過研究stathmin-1、P27、P53、P16、ki-67在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)，結(jié)合患者HPV感染的狀況及術(shù)后的預(yù)后及復(fù)發(fā)，探討stathmin-1對宮頸上皮內(nèi)瘤變預(yù)后的影響及與相關(guān)分子蛋白表達(dá)的相互作用，探討stathmin-1與高危HPV感染持續(xù)存在的關(guān)系。并利用慢病毒載體進(jìn)行宮頸癌細(xì)胞中stathmin-1

3、基因沉默，進(jìn)一步探討其影響宮頸疾病發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的作用機(jī)制。研究共分為四部分。
　　一、Stathmin-1和P53蛋白在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與疾病復(fù)發(fā)關(guān)系及Hela細(xì)胞內(nèi)stathmin-1影響P53蛋白表達(dá)的機(jī)制研究。
　　目的：為了解stathmin-1與P53蛋白對宮頸上皮內(nèi)瘤變預(yù)后的影響，檢測Stathmin-1和P53蛋白在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中的表達(dá)，探討其對宮頸上皮內(nèi)瘤變錐切術(shù)后復(fù)發(fā)的影響及

4、機(jī)制；并研究stathmin-1表達(dá)在宮頸癌Hela細(xì)胞內(nèi)影響P53蛋白表達(dá)的機(jī)制及對細(xì)胞增殖的影響。
　　方法：收集2010年1月1日-2013年1月30日因高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變行宮頸冷刀錐切，術(shù)后復(fù)發(fā)病例30例為復(fù)發(fā)組，隨機(jī)抽取同期因同疾病行宮頸錐切術(shù)隨訪2年無復(fù)發(fā)病例30例為對照組，調(diào)取兩組患者首次錐切的組織蠟塊，利用免疫熒光及免疫組化法對兩組組織中Stathmin-1和P53蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測。構(gòu)建Stathmin-1siR

5、NA慢病毒載體，包裝重組慢病毒，感染宮頸癌hela細(xì)胞株，沉默Stathmin-1表達(dá)，為干擾組，采用導(dǎo)入陰性片段的慢病毒感染Hela細(xì)胞作為對照組。MTT（噻唑藍(lán)）法檢測細(xì)胞增殖差異，蛋白印跡法（western-blot）檢測細(xì)胞P53蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：復(fù)發(fā)組P53蛋白陽性表達(dá)率為70.0％，明顯高于對照組（36.7%），復(fù)發(fā)組stathmin-1陽性表達(dá)率83.3%，明顯高于對照組（33.3%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

6、.05)；復(fù)發(fā)組Stathmin-1與P53蛋白均陽性率70.0%，明顯高于對照組（26.7%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。感染重組慢病毒及陰性對照病毒后，Stathmin-1基因干擾組hela細(xì)胞增殖24h后較對照組抑制明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），干擾組中P53蛋白與對照組相比，表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：Stathmin-1與P53蛋白過表達(dá)可能與高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變術(shù)后復(fù)發(fā)

7、有關(guān)，宮頸癌Hela細(xì)胞中stathmin-1影響P53蛋白表達(dá)，沉默Stathmin-1，可抑制細(xì)胞增殖，并抑制細(xì)胞內(nèi)P53蛋白表達(dá)。
　　二、Stathmin-1在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變中與P27、P16及ki-67表達(dá)的相互關(guān)系及意義。
　　目的：研究stathmin-1與P27、P16及ki-67在高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變中表達(dá)的相互關(guān)系及對疾病的預(yù)后的影響。
　　方法：對2010年1月至2013年6月因?qū)m頸上皮內(nèi)瘤

8、變Ⅱ-Ⅲ級行宮頸錐形切除患者進(jìn)行隨訪，將病理證實(shí)復(fù)發(fā)病例36例設(shè)為復(fù)發(fā)組，隨機(jī)抽取未復(fù)發(fā)病例40例作為對照組。采用免疫組化法檢測兩組病例首次宮頸錐切組織中stathmin-1、P27、P16及ki-67的表達(dá)。
　　結(jié)果：Stathmin-1復(fù)發(fā)組30例(83.3%)陽性，對照組16例（40%）陽性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。P27復(fù)發(fā)組27例（75%）陽性，且表達(dá)于胞漿，對照組19例（47.5%）陽性，多表達(dá)于胞漿，差異

9、有統(tǒng)計(jì)性（P<0.05）。P16與stathmin-1均陽性表達(dá)46例，均陰性表達(dá)23例，pearson相關(guān)系數(shù)r為0.63（P<0.001）；ki-67與stathmin-1均陽性表達(dá)42例，均陰性表達(dá)13例，pearson相關(guān)系數(shù)r為0.38（P<0.05）。
　　結(jié)論：stathmin-1與P27高陽性表達(dá)可能與高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變復(fù)發(fā)有關(guān)，stathmin-1高陽性表達(dá)與P16、Ki-67的高陽性表達(dá)有一定的相關(guān)性，可能是

10、stathmin-1影響高級別CIN預(yù)后的機(jī)制之一。
　　三、宮頸上皮內(nèi)瘤變術(shù)后人乳頭瘤病毒持續(xù)感染與Stathmin-1表達(dá)相關(guān)性及臨床意義。
　　目的：檢測宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中stathmin-1的表達(dá)及人乳頭瘤病毒（HPV）感染，探討stathmin-1與錐切術(shù)后HPV持續(xù)感染的相關(guān)性及臨床意義。
　　方法：收集2009年1月至2013年1月因CIN2-CIN3行宮頸錐形切除后病例，將其中36例復(fù)發(fā)病例設(shè)為

11、復(fù)發(fā)組，隨機(jī)抽取70例未復(fù)發(fā)病例設(shè)為對照組。免疫組化法檢測兩組病例錐切組織stathmin-1的表達(dá)，HPV-DNA法檢測高危HPV感染，并分析兩組病例術(shù)后HPV感染持續(xù)情況及與復(fù)發(fā)的關(guān)系。
　　結(jié)果：復(fù)發(fā)組中32例（88.9%）stathmin-1陽性；30例（83.8%）合并HPV持續(xù)感染，其中28例stathmin-1陽性表達(dá)。對照組中24例（34.2%）stathmin-1陽性表達(dá)；16例（22.9%）合并HPV持續(xù)感染，

12、其中14例stathmin-1陽性表達(dá)。Stathmin-1陽性表達(dá)與HPV持續(xù)感染有相關(guān)性（P<0.001）。復(fù)發(fā)組與對照組相比stathmin-1陽性表達(dá)率及HPV持續(xù)感染率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。
　　結(jié)論：stathmin-1高陽性表達(dá)與宮頸錐切術(shù)后患者HPV持續(xù)感染有相關(guān)性，可能影響高級別CIN預(yù)后，為防治高級別CIN復(fù)發(fā)提供新的思路和理論依據(jù)。
　　四、Stathmin-1對chk1表達(dá)及對宮頸癌細(xì)

13、胞運(yùn)動和侵襲力的影響研究。
　　目的：研究stathmin-1與chk1在宮頸癌細(xì)胞中的相互作用機(jī)制，宮頸癌細(xì)胞中stathmin-1表達(dá)對宮頸癌細(xì)胞運(yùn)動及侵襲力的影響，探討其在宮頸癌疾病進(jìn)展中的作用及機(jī)制。
　　方法：收集40例宮頸癌原發(fā)病灶標(biāo)本，根據(jù)術(shù)后病理有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為宮頸癌非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（24例）及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（16例），采用免疫組化法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測兩組標(biāo)本stathmin-1表達(dá)。構(gòu)建Stathmi

14、n-1siRNA慢病毒載體，包裝重組慢病毒，感染宮頸癌hela細(xì)胞株及C33A細(xì)胞株，在宮頸癌細(xì)胞中沉默Stathmin-1表達(dá)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及western blot法檢測感染癌細(xì)胞中chk1表達(dá)，采用轉(zhuǎn)入陰性片段的慢病毒感染Hela細(xì)胞及C33A細(xì)胞作為對照。細(xì)胞Transwell小室法檢測其對宮頸癌細(xì)胞運(yùn)動和侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：stathmin-1mRNA在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)明顯高于對照組（P<0.001）；

15、宮頸癌細(xì)胞中沉默stathmin-1表達(dá)使Chk1表達(dá)較對照組細(xì)胞明顯減少（P<0.01）；沉默stathmin-1的Hela細(xì)胞和C33A細(xì)胞增殖較對照組細(xì)胞在24小時(shí)后明顯減慢（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的運(yùn)動、侵襲力也較對照組細(xì)胞明顯降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：stathmin-1過表達(dá)可影響宮頸癌細(xì)胞增殖力、運(yùn)動力和侵襲力，可能是宮頸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的因素之一，stathmin-1表達(dá)降低可以降低chk1表達(dá)，提示兩者可能